人β-防御素3基因的克隆分析及其真核表达载体的构建

根据Genebank上公布的β-防御素3基因序列设计引物,以提取的人DNA为模板进行PCR扩增,得到全长为1391bp的β-防御素3完整基因组序列,包括起始序列、信号肽序列、2个外显子、1个内含子以及上下游酶切位点和终止密码子等。与NCBI上公布的DNA序列的同源性达到99.93%,在内含子上有1个A的缺失,其编码氨基酸序列与公布序列的同源性达100%。将其克隆到pMDl8.T载体中,进一步构建

中国虐擘通报 2 1,80 ) 92 0 2 (5:—2 2 1 Ch ne eAg iu t r l inc ltn i s rc lu a e eBulei Sc

人防御素 3因的克隆分析及其真核表达载体的构建基 黄仙仙徐婷婷徐雪丽，,, 赵卫东t郑振宇， ,, 李春丽 (河南农业大学生命科学学院， 郑州 4 0 0;南农业大学牧医工程学院， 5 02河郑州 4 0 0 ) 5 02

摘要：据 G nbn上公布的 .根 eeak防御素 3因序列设计引物，基以提取的人 DNA为模板进行 P R扩 C增，到全长为 19 p的一得 31 b防御素 3完整基因组序列，包括起始序列、信号肽序列、 2个外显子、个内 1

含予以及上下游酶切位点和终止密码子等。与N B上公布的D A序列的同源性达到 9.%,内含 CI N 93在 9 子上有 1 A的缺失，编码氨基酸序列与公布序列的同源性达 10个其 0%。将其克隆到 p MD1. 8T载体中，

进一步构建了其真核表达载体 pD A h D, c N—B 3为其表达和功能研究奠定基础。 关键词：一 防御素 3克隆；;真核表达载体 中图分类号： 1 Q82文献标志码： A论文编号：0 1 0 1 2 1- 9 2

C o iga dS q e c ayi o ma - ee s n lnn n e u n e An ls f s Hu n d fni Ge e l f n3 a d Co sr c i n I k r o i p e so c o n n t u to t Eu a y tcEx r s i n Ve t r s Hu n a xin, n tn Xu Xuei, a g Xin a Xu Ti g i g, l Zha ed ng Zhe oW i o, ngZhe u, u i ny 2 Li Ch nl

( eat etf i i c, ea r u ua n e i, h n zu 5 0 2 p r no L e c neH nna i l rl i r t Z eg ho4 00; D m f Se g c t U v sy 2 eat etf n l n t i r i c t n nar utrl nvrt, hn z u 5 02 Dp r n a i dv e n ySe e t a gi l a U i sy Z egh o 0 0 ) m o ma a e r a c n, e c u ei 4 Ab t a t sr c:On a ro r e

ss n h sz d a c r i g t e s q e c fh e p i fp i rwa y t e i e c o d n o t e u n e o BD3 p b ih d i n b n . m h u l e n Ge e a k s

T e 19 p o u nJ d fn i一 e o c e u n ewa ba e c dn h in l e un e t h b fh ma -ee s 3g n mi sq e c so ti di l ig tes a sq e c,wo 31 B n s n nu g e to,o e i t n a d r sr t n e z me st n n o e x r n n n r n e t c i n y i a d e d c d .Co a e t h e u n e p b i e n o i o e mp r d wi t e s q e c u l h d i h s NCBI 9 93 n c ec a i swe e t e s m e e e tf radee i n i nto, 9.% u l i c d r h a xc p o l to n i r n.1 0 a n c d wa a . % mi o a i ss me The 0

s q e c sf s s re t M D 1一 e t r t e s r d i t h c e u n e wa r t n et d i o p i i n T v co, h n i e t n o t e p DNA3 1 v co ih r s l d i 8 n e . e t rwh c e u t e n t e e k r o i x r s i n v c o CDNA— BD3 T i wa h a e f r f r e t d fi x r s i n a d h u a y t e p e so e t r p c h . hs s t e b s o u t r s y o s e p e so n h u t f nc i n. u to

Ke r sJ d f s -; lc l o ig e k roi e pes nv co ywod:—ee i 3 moeua c nn; u a t x rsi etr B n n rl y c o O引言

菌和阴性菌都具有强烈的抑制和杀灭作用，且可以并杀灭真菌、药的病源微生物及其 HI-病毒。并且耐 V1其细胞毒性小，具有独特的研究和应用价值。 1。

防御素是生物分泌的一类低分子短肽，具有广谱

高效的杀菌、抗肿瘤作用，并不易使微生物产生抗药性，有很

高的应用价值。根据其空间结构及其二具 硫键的连接方式，为、、分 防御素口。目前在人类中 大约有 3 O多种防御素，防御素 .(B 3是在 2 0 一 3h D ) 01年发现的一种新防御素，与其他发现的防御素相比， . 在抗菌活性等方面具有明显的优势，对革兰氏阳性其

由于人工合成 h D的价格比较昂贵， B3又缺乏切 实可行的替代获取途径，因此，用基因工程方法生产利 h D用于研究是一有效的途径。目前 h D大多在原 B3 B 3核细胞中表达，要复性或者需要切割掉融合标签才需 能有活性]。而在真核细胞中表达具有明显的优势，

基金项目：河南省自然科学基金项目“一种新型抗生素的研究一人防御素的克隆表达”3 3 0 5 ) (0 0 0 6。 第一作者简介：仙仙，, 9 6出生，南开封人，黄女 18年河硕士。通信地址：5 0 2河南省郑卅市文化路 9号河南农业大学生命科学学院， e 400 l 5 Tl: 0 7 35 2 2E ma .in 6 0 5 6 . r。 3 16 54 1, - i xa 8 1 1@13c n l o

通讯作者：李春丽，,9 1女 17年出生，南洛阳人，教授，河副研究生，博士，从事遗传学研究。通信地址： 5 0 2河南省郑州市文化路9号河南农业 4 00 5 大学牧医工程学院， e:3 16 5 8 8, . i t l@ 13cr。 T l0 7—3 5 10 E mal mcl 6 . n : i o收稿日期：0 10 .0修回日期：0 10 .。 2 1-72, 2 1-86

第1页