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hGH单克隆抗体的筛选及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用杂交瘤法制备单克隆抗体,并用辛酸-硫酸铵法纯化单抗,通过ELISA方法和Western blotting测定抗体的效价与特异性,并进行抗体类型、相对亲和力测定;应用纯化的单抗建立hGH双抗体夹心ELISA检测方法。筛选出两株可以稳定分泌抗hGH单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为3E11、2G9,抗体类型均为IgG1,抗体滴度均可达10-10,特异性好,相对亲和力高,以筛选到的两株单抗建立的双抗夹心ELISA法线

第2 8卷第 5期 21 0 1年 1 0月

生物学杂志 J RNAL OF BI OGY OU OL

V0 . 8 No 5 I2 . 0e .2 t 011

di 0 36/.sn2 9 13 .0 10 .9 o: .99 ji .0 5— 7 6 2 1. 50 4 1 s

h H单克隆抗体的筛选及双抗体夹心 G E IA检测方法的建立 LS 饶圣宏刘,文游,牧徐振山,, 宋礼华。 (.安徽大学生命科学院, 1合肥 20 3; . 30 9 2安徽医大学生物化学与分子生物学教研室,科合肥 203; 302 3 .安徽安科生物工程(集团)股份有限公司,合肥 20 8 ) 30 8 摘要:采用杂交瘤法制备单克隆抗体,并用辛酸一硫酸铵法纯化单抗,通过 E IA方法和 Wet nboig测定抗 LS s r ltn e t

体的效价与特异性,并进行抗体类型、相对亲和力测定;应用纯化的单抗建立 h H双抗体夹心 E IA检测方法。筛 G LS选出两株可以稳定分泌抗 h H单抗的杂交瘤细胞株,别命名为 3 2 9抗体类型均为 IG, G分 E G, g 1抗体滴度均可达 1, 0特异性好,相对亲和力高,以筛选到的两株单抗建立的双抗夹心 E IA法线性范围为 00 LS .9~152 n/ L .6 5 g m, R> .,灵敏度为 0 0 n/ L 09 .9 g m。筛选出高效抗 h H的单抗, G并建立了 h H双抗体夹心 E IA检测方法。 G LS 关键词:人生长激素;克隆抗体;单双抗体夹心 E IA法 LS中图分类号:5 3 R 9 .1 Q 0; 3 2 1文献标识码: B文章编号:0 5—13 (0 1 0 0 9 0 29 76 2 1 )5— 04— 4

S r e i g o o o l n la tb d g i tr c m b n n u a r wt c e n n fm n co a n i o y a ans e o i a th m n g o h ho m o e a d d v l p e t o o b e a tb d a d c r n n e e o m n f d u l n i o y s n wi h ELI A o GH S f rh RAO S e g h n,L U e,YOU ,XU h n s a。 S h n—o g I W n Mu Z e .h n ONG ih a L—u ,

( .C l g f i ce c,A h i nvri,He i 3 0 9 .D p r n f

Bo h mi r n lc l ilg, 1 ol eo f S in e n u ies y e Le U t f 0 3;2 e at t i e s ya d MoeueB ooy e2 me o c t

A h i dcl n e i, e i 30 2 3 n u A k ieh o g g u )C . Ld H fi 3 0 8 C ia n u Mei i rt H f 03; .A hi n eBo enl y(r p o, t, e 0 8, hn ) a U v sy e2 t o o e2 Abtat T centem neoa at oy( c b gisrcm iat u n rwhhr o e(h H)addvl o be ni s c: o re ool l n bd M A )aa teo bnn hma o t om n rG r s h n i n g n eeo a u l at p d — b d a d c L S o GH,te Mc b wa r p r d b sn y r o e h i u n u f d b a rl cd a o y s n wih E I A frh h A sp e a e y u i g h b d ma t c n q e a d p r i y c p yi a i—mmo i m u— i i e c nu s l p aepe ii t n h t r cp t i .T e Mc sa ay e o y e i ri s i s ea ie af i n p cf i .B s g t e p i o A s ao h AB wa n l z d f rtp,t e n a c t,r lt f n t a d s e i ct t e v i y i y y u i ar fMc b,a n h d u l n i o y s n wih EL S meh d w s e t b i e . T y r o e l sr i s t by s c e ig Mc b a an t h H r o bea t d a d c IA b t o a sa l h d s wo h b i ma c l tan sa l e r t A g is G we e d n s r e e .T e s c ee A sw t i ro 0一 n 0~ wa g t o d s e i ct .T e l e rrn ea d R a u f e e t n ce n d h e rt d Mc b i a t e f h t 1。a d 1 s IG1wi g o p cf i h i y h n a a g n 2 v l e o t ci i d o r s l w r . 9 g mL a d

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人生长激素 (u a rwhhr o e h H)为人 hm ngo t o n, G作 m

h H单克隆抗体建立了 h H双抗体夹心 E IA检测 G G LS

体生长不可缺乏的成分,由脑垂体前叶嗜酸性细胞是 分泌的单一肽链蛋白质激素,具有广泛的生理功能。正常人血清 h H分泌呈脉冲式,助一些激发] G借试验、抑制试验以及基础值的测定,有助于生长激素分 泌紊乱的诊断]。本文以两株特异性高、和力高的亲 收稿日期:0 0一l—2修回日期:0 1—0 0 21 1 9; 21 1— 5

法,了 RA中的放射性污染,有较高的灵敏度,避免 I具 从而可以在临床上更好地提供诊断依据。 1材料 1 1材料及试剂 .

1 1 1材料 ..

作者简介:饶圣宏,,女安徽省安庆人,硕士研究生,专业方向:基因工程,— a: o egog i to; Em i r s nh n@s a c ta h n r n通讯作者:宋礼华,,男研究员,博士生导师,主要从事生物工程与蛋白芯片技术研究, - a: og@ak b o。 E m i s l n ei cn l ni o

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