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双抗体夹心ELISA检测HIV-1 gp41抗原方法的建立

双抗体夹心ELISA检测HIV-1 gp41抗原方法的建立

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文章编号!988:;<<<7=7884>84;8:78;87

生物技术通讯

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./0123’/14’/5167884

技术方法

双抗体夹心"!&%?检测+&.;9@AB9抗原方法的建立

于澜!徐志凯!王海涛!黎志东!张芳琳

第四军医大学微生物学教研室!陕西西安39<<C7!摘要"

目的#建立检测+&.;9@AB9抗原的双抗体夹心"!&%?!并探讨其临床应用的可行性"方法#用饱和硫酸铵#%?%$纯

化抗+&.;9@AB9;D单克隆抗体#E?F$!用+$G标记后建立双抗体夹心"!&%?法!对其灵敏度及特异性进行检测!并用该方法对B<份+&.;9阳性血清进行了检测%结果#用E?F"97&D!@HE!$为包被抗体!7+4为酶标记抗体&9I:88$建立了双抗体夹心"!&%?法!检测@AB9;D多肽的灵敏度是988A@HE!%对+&.;9阳性血清中@AB9抗原的检出率为43JDK&73LB8$%结论#建立了特异性强’灵敏度良好的检测+&.;9@AB9抗原的双抗体夹心"!&%?法"!关键词"

+&.;9(@AB9(@AB9;D(单克隆抗体(双抗体夹心酶联免疫吸附试验

MD8C

!文献标识码"

!中图分类号"N

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+&.;9h@AB9h@AB9;DhE/T/X0/TQ0QTSWF/]YhQTSWF/]Y;_QT]cWX\"!&%?

采用正辛酸;硫酸铵法i3j对B株E?F进行纯化后!用改良过碘酸钠法ikj将纯化的E?F以+$G进行标记$

+&.属于逆转录病毒!已发现有+&.;9和+&.;7两型!其

中+&.;9是引起全球艾滋病"?&O%#流行的主要病原$?&O%是对人类最具威胁性的疾病之一i2j!目前尚无有效的根治方法$普及

2JC酶标抗体工作浓度的确定

以D!@HE!@AB2;D多肽包被微板!加人不同稀释率的酶标

+&.;2的检测!尽早发现感染者!控制其传播!是预防和控制?&O%的重要措施$目前用"!&%?法检测血浆或血清中的特异性

抗体和"或%抗原是检测+&.;2感染最常用的方法i7j!而在&窗口期’检测抗原有望能比检测抗体更早发现+&.感染iC6Bj$

抗体!显色后测定9B:7TE值$以9B:7TE值为纵坐标)结合物浓度为横坐标绘制滴定曲线$由曲线上查得9B:7TE值为2J<左右!且曲线斜率最大时的酶标抗体稀释度!即为该标记物的工作浓度ikj$

+&.;2囊膜糖蛋白@AB2是+&.;2感染中最早出现的蛋白

抗原之一$而@AB2;D多肽具有显著的@AB2核心结构特性iDj!以该多肽作为免疫原可诱生出针对@AB2天然构象或融合态构象的单克隆抗体(E?F#$本实验应用抗@AB2;D的E?F初步建立了以检测@AB2抗原为目的的双抗体夹心"!&%?!并检测了部分

2JB不同E?F的配对试验

用双抗体夹心"!&%?法进行抗体配对实验$以系列稀释的

各株纯化的E?F分别包被"!&%?板!Bl过夜!次日用GN%;#洗涤C次!加D!@HE!@AB9;D多肽!C3l作用9\!再洗涤C次!然后加工作浓度的酶标抗体!C3l作用9\!洗涤后加)GO底物作用9DEWT*以GN%液为阴性对照6以@AB9;D多肽免疫小鼠阳性血清为阳性对照!经显色后测定9B:7TE值$比较同一稀释度下!由不同配对E?F检测@AB9;D多肽的9B:7TE值!以9B:7TE值最高者为最佳配对$

+&.;2阳性血清!对该方法的应用进行了初步探讨$

2

2J2

材料与方法

材料

抗@AB2;D多肽的B株E?F("2<)7+4)7*2和"27%均由本

9JD灵敏度及特异性测定

以已确定的配对E?F分别包板和作为酶标记抗体!采用双

室制备i4j$辣根过氧化物酶(+$G%购自北京鼎国生物技术有限公司$+&.;2阳性血清由陕西省防疫站艾滋病检测中心提供$

抗体夹心法检测系列稀释的@AB9;D多肽!出现阳性反应的

!收稿日期"7<<4;<C;9C

!作者简介"于澜(9:33;#!女!助教!硕士!(";EQW0#0QT0QT9<C9m_WTQJX/E

2J7E?F的纯化及酶标记物的制备

第1页

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