罗汉松根瘤内生细菌的分离和特性

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4 2卷 5期 2 0年 l月 02 0

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罗汉松根瘤内生细菌的分离和特性 黄宝灵吕成群唐东阶柏学亮熊英韦源莲 (西大学广南宁 5 00 ) 30 4

关键词：汉松，根瘤，细菌，分离特性，回接结瘤罗 中图分类号： 9 9 1 4 Q3 .1 文献标识码： A文章编号：0 16 0 (0 2)0—6 00 0 0—2 9 2 0 50 2— 5

罗汉松 P d c ru m e p yl ( h n ) o oap s a r h l s T u b. D.D n是裸子植物亚门罗汉松科一种，我国主产长江以 o u o在南各省，用材及园林绿化的优良树种，子和根可人药。关于罗汉松根际微生物的研究，秀棠、为种梁花

晓悔曾报道其根与菌根真菌共生形成外生或内生菌根。国外有学者发现，种其它的罗汉松科植物几 P.uie等具有结瘤固氮现象 nb n g,对其与细菌共生形成根瘤以及根瘤内生细菌的分离鉴定至今但

国内外尚未见报道。作者在广西的南宁、林、绥及广东的佛山等地进行野外调查，明罗汉松在自桂扶证 然界中普遍具有结瘤现象。现将 19 9 6年 l 2月在广西南宁市郊采集的罗汉松根瘤样品进行分离鉴定。 l材料和方法 1.样品采集与菌种分离 1

从树龄约 l 3年生的罗汉松连体侧根上采集结瘤量多的细根，来水冲洗干净后，分用于电子显自部微镜镜检， 7%乙醇对其余根瘤进行表面消毒 l n再用 0 1的 H C消毒 5 i~6 i。将根瘤连同用 5 mi, .% g1 mn mn细根置于灭过菌的研钵中研磨，少量无菌水，匀后加盖静置，清片刻。取上清液用划线法接种于加研澄 Y MA培养基上， 2℃~3℃下培养 1在 8 0周，得细菌 L S 6 1获 H 90。 1.菌种的纯化与鉴定 2

将 L S 6 1菌落进行平板划线分离，重复稀释分离 2次，用刚果红平板划线分离。接种斜 H 90菌

再后面，行革兰氏染色，学显微镜及电子显微镜镜检。然后进行生理生化特性反应，区别土壤农杆进光以 菌。

1 2 1细菌形态观察：革兰氏染色和鞭毛银盐染色法。 ..用 122刚果红吸色：8培养一周观察结果。 .. 2℃ 1 2 3 B. . .. T B反应：加入 0 5溴麝香草酚蓝 Y在 .% MA培养基上接种一周后观察结果。 124淀粉水解、胶水解、蕊一奶反应、源利用、源利用：按常规方法，周后测定结果。 . .明石牛碳氮均一 1 2 5温度实验：别在 9、2、7、0、0、9和 4℃处理。 ..分℃ l℃ 1℃ 2℃ 3℃ 3℃ l

126电子显微镜扫描： ..日本产 J M一20 X S透射电子显微镜扫描瘤体外观，测细胞剖面及 2 h培 E 10 E/检 4 养物。

以卜实验均设 5个以上重复和空白对照。 1. 3回接试验

采用试管封闭式水培法。选用 2 5 m×2 c的试管， Jne .e 0m取 e sn培养液或土壤浸出液 (鲜黄心新土：自来水 1 1 2, t清液， 0层纱布过滤 )量装入试管中， 8 P 2℃高压灭菌 2 i。:浸 d取 l适 9 k a1 1 5

国家自然科学基金资助项目 ( 0 7 0 3 3 10 3 )作者简介：宝灵 ( 9 7 )女，研究员，要从事森林生态学研究，系电话： 7 1 2 2 9黄 15一，副主联 0 7. 7 1 1 3收稿日期：0 1 1.O.回日期：0 20 . 2 0 . 23修 2 0 .40 4

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