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inducer-H印g£0109y,2000,32:4∞一412.
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0f咖hotoxin betB
zlIejia啦UrIivSCI,2005,6B:295.300.
[13]LosY,M拍ia亿F,HwaJlgSB,eta1.Di妇fe弛rnialsIlb_ceUIll盯
locaIi龃ti帆ofhe州tisCvi叫co∞彦eneproduc怔.Vimlo盯,
1995,213:455461.
V砌,1997,7l:1301.1309.
[5]颜学兵,陈智,Bourcr—D,等.丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋
白激酶R的功能区域研究.中华传染病杂志,2005,23:l-5.[6]颜学兵,陈智,BourcreuD,等.癌周及癌中心不同截短片段丙
型肝炎病毒核心蛋白表达质粒的构建和表达.中华肝脏病杂志,2004。12:643J钳7.
[14]challg
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a1.Nucl哪locali枷∞8i掣lal暑
BiochemBiophy8R髑
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0fhepatiti8Cvinls.
CoⅢun。1994,205:1284一1290.
[15]Falc曲V,AcoBt且.RivemN。ChineaG。哦且1.Nucle盯localization
ofnucleocap8id.1ike0f
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[7]JinDY,w阳g
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J.2000,19:729.740.
HCV.ir氐ted
Co岫u.2003.310:54-58.
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[8]HopeRG,Mc【∞chkmJ.sequenceⅢ柑豫■iredh
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thefuncdonofHCV
c0陀pmtein.JCenVilol,2000,81:1913-1925.
Bioph聃R∞Co咖un。20|02,294:52l-527.
[9]赵和平,程宝珠,郭慧安,等.丙型肝炎病毒基因分型及其与干
扰素治疗应答的关系.中华实验和临床病毒学杂志,1998,
12:15一17.
[17]陈良标,陈佩兰,范公忍,等.丙型肝炎病毒核心蛋白在患者
外周血单个核细胞内的核表达检测.中华实验和临床病毒学
杂志,2002,16:37-39.
『18]sll勾lkiR,Mat蚍umY.S唧kiT.eta1.Nuck盯l∞ali盟6加0f
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[10]RapicettB
M,A唱en血dc,
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eta1.M0l∞ul盯
hetemgeneity锄dn洲Bubtyp髑0fHCVgenotype
1998.149:293-297.
4.R船V砌,
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Gen
[11]Lunel
aI.upd砒e∞hepatiti8c
mdtIlevim8:itBvariabilityiInpHcationB.TrndhClinBiol,
F,stIlyverL,Brechotc,et
1998.5:147-165.
z,LuoDH,et
V砌.1995,76(Ptl):53—61.
(收稿日期:200r7聊-10)
(本文编辑:唐栋)
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.专家答疑.
如何利用辞No珊软件筛选基因表达测定的内参基因?
答:随着实时荧光定量PCR成为检测基因表达谱的高通量、高精度的方法,基因表达分析在生物学研究中得到广泛应用。采用稳定的内参基因对反应进行标准化可以增加该方法的敏感度、重复性和动态范围,理想的内参基因在所研究的组织、细胞和实验条件下均恒定表达。管家基因是维持细胞最低限度功能不可少的基因,在所有类型细胞中都表达,是广泛应用的内参基因。但是,很多研究表明管家基因在不同组织、细胞以及不同条件下表达量并非永远恒定,甚至差别很大,至今尚未发现在所有条件下均恒定表达的管家基因。因此,对特定基因表达研究中候选管家基因的表达稳定性进行评价,筛选出最为稳定的管家基因作为内参基因,对保证研究结果的真实、可靠至关重要。
V蚰de∞mpele等(2002年)开发了geNo硼这一用于微软Excel平台的VBA宏程序,用于荧光定量PcR中候选内参基因的稳定性评价及确定合适的内参基因数,该程序可从互联网上免费下载。其依据的原则是两个理想内参基因表达水平的比值应该在所有标本中一致,不论在何种实验条件或者细胞类型。该法不受基因间表达丰度差别和极端比值的影响,比值变异度的增加意味着二者中其一或全部基因表达稳定性的降低。通过计算某一基因与其他所有基因间两两比值的对数转换值的平均变异度Ⅳ作为基因稳定性的评价指标,即:首先将荧光定量PCR得到的循环阈值(ct)转换
(胡金川)
为相对定量数据,方法是找到最低ct值的基因(表达量最高),用所有其他基因的Ct值减去最低Ct值,得到△ct,其值≥O,每个基因相对于最高表达水平基因的相对表达量为2也Q。然后制作Excel表格,列标题为标本名称,行标题为基因名称,将计算得到的各标本各个基因的2也。数值输入表格。将该文件保存到geNo册安装文件夹下,关闭所有Excel
程序。启动geNo珊程序,根据操作说明点击自动分析按钮,
程序自动给出膨值折线图,该图显示了逐步去除最不稳定表达的内参基因过程中每一步骤各内参基因平均表达稳定性数值肘,肘值越小,基因表达越稳定,该图对各管家基因稳定性进行了排序。再次点击自动分析按钮,将给出配对变异
分析%川结果图,该图显示了需要选择内参基因的数目,
建议y<O.15为选择阈值,如‰<O.15,表明只需选择2个
内参基因作标准化指标。利用该程序,研究者可以对特定研究的多个管家基因进行筛选,选出2个以上管家基因作为内参,有助于校正系统偏差以得到更可靠的结果,这对于基因的准确定量,尤其是细小表达差异的基因表达研究具有极其重要的价值。
(收稿日期:2008舶-13)
(本文编辑:张莉)
万方数据
—PCR技术对其在茎点枯病菌侵染 过程中的表达定量,利用BestKeeper、NormFinder和GeNorm软件分析它们表达的稳定性,以期为抗 病相关基因的相关研究提供合适的内参基因。...
(5):546~550www.pibb.ac.cn 基因表达转录分析中内参基因的选择 *张艳君 1,...(图1).geNorm 软件以 0.15 为默认取舍值,即当 Vn/n+1<0.15时,说明没...
在基因表达分析中, 有时使用单一的内参基因 校正不符合试验的要求, 因此需要 2...会得到每个基因的表达稳定值, 同时还提供当使用图3 geNorm 软件分析各内参基因...
目前国内尚未见甘蔗基因表达定量 PCR 分析内参基因筛选的相关报道 。 本研究选择...geNorm 软件以 0.15 为默认取舍值 , 即当 Vn/n+1 <0.15 时,没必要使用...
在毛唇芋兰叶片、叶柄和球茎 3.4 内参基因的选择 利用 GeNorm 软件对各内参基因的 Q 进行统 计分析,通过计算基因的表达稳定值( M )评价 基因的表达稳定性。...
介绍qRT-PCR的内参基因,如何选择,如何分析其稳定性,...常用的软件有: geNorm, NormFinder, BestKeeper, ...多内参基因SD的计算 目标基因SD的计算 参照geNorm的...
LPS诱导下THP-1细胞基因表达内参基因的筛选_生物学_自然科学_专业资料。口 口 中西 医结口 合心脑血管病 杂志 201 3年1O 月第 l1 卷第 1 O期 叩 Friedman...
二斑叶螨内参基因的筛选及解毒酶基因的表达水平_生物学_自然科学_专业资料。中 国农 业科学2013,46(21):4542—4549 Scientia Agricultura Si中...
GeNorm 软件根据计算出的每个候选基因表达稳定度 M(average expression stability values)进行排序,M 值越高,表达越不稳定,反之,则越稳定;同时,通过对 候选内参基因...
聚合酶σ70 因子)八个候选基因在正常生长 和持续光照条件下的稳定性进行了检测...用geNorm软件对实验数据进行处理,从中选出合适的内参基因。 结果表明RPL13和CYP38...
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