4株苯系物降解菌菌株的筛选鉴定_降解特性及其降解基因研究

4株苯系物降解菌菌株的筛选鉴定、降解特性

及其降解基因研究

王　琳,邵宗泽

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(国家海洋局第三海洋研究所海洋生物遗传资源重点实验室　厦门　361005)

摘　要:分别以苯、甲苯为碳源,2株甲苯降解菌J2、J6。16SrRNA基因鉴定结果表明B1、J2P)、J6属于不动杆菌属

(Acinetobactersp.)。研究表明,～10011%(VΠV)苯或甲苯为唯一碳

,6717%、9412%,J2、J6菌对甲苯的降解率分别为

9214%18、,表明苯降解基因在这些降解菌

,J6两株菌还含有甲苯双加氧酶基因,而且J2能在甲苯浓度为70%(VΠV)的LB培这些降解菌在苯、甲苯污染的生物治理中有应用前景。关键词:苯系物;生物降解;有机溶剂耐受性;双加氧酶基因

中图分类号:Q939　　文献标识码:A　　文章编号:000126209(2006)0520753205

　　苯系化合物是一类易挥发的单环芳香烃类化合

物,包括苯、甲苯、乙苯、邻、间、对二甲苯等,已被许

[1]

多国家列为优先控制污染物。已报道的苯系物降解菌主要有假单胞菌(Pseudomonas)、不动杆菌(Acinetobacter)、芽孢杆菌(Bacillus)、红球菌(Rhodococcus)、诺卡氏菌(Nocardia)、罗尔斯通氏菌

[2,3]

(Ralstonia)、产碱杆菌(Alcaligenes)等。苯系物双加氧酶和单加氧酶是降解过程中的关键酶,双加氧酶是在苯环上直接加2个氧形成儿茶酚;单加氧酶则直接攻击苯环或者氧化侧链,进而形成儿茶酚,再经过儿茶酚双加氧酶作用使苯环裂解,进一步被降

[4,5]

解后进入三羧酸循环。

此外,苯系物降解与有机溶剂耐受相关。自从日本Inoue和Horikoshi分离到一株能够耐受50%

[6]

(VΠV)甲苯的假单胞菌以来,一些耐受高浓度有机溶剂的菌陆续被分离到,并展开了相关研究。降解菌耐受有机溶剂不仅对污染物的生物治理非常重要,且在溶剂2水两相生物转化中也有很大的潜[7]

力。在国内,苯系物生物降解研究目前主要集中在降解性能方面,如降解速率和底物浓度关系,生长

[8,9]

的适宜pH、温度等。其他方面报道较少。本研究从城市污水中富集得到了多种苯系物高效降解菌,并对其降解特性、基因类型进行了分析。

基金项目:中国大洋协会资助项目(DY105204202206)

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1　材料和方法

111　材料

11111　样品:2003年10月采自厦门前浦污水处理

厂离心间活性污泥。

11112　试剂:苯,甲苯色谱标准,纯度大于9915%,

购自中国上海试剂一厂。其它试剂均为分析纯。

11113　培养基:选择性无机盐培养基(MM):每升含NaCl110g,MgSO4 7H2O017g,NH4Cl110g,KCl017g,KH2PO4210g,Na2HPO4310g,pH710,高压灭菌后补加

适量微量元素混合液。微量元素混合液每升含CaCl20102mg,FeCl3 6H2O015mg,CuSO401005mg,MnCl2 4H2O01005mg,ZnSO4 7H2O011mg。以苯或

甲苯作为唯一碳源,终浓度为011%(VΠV)。苯、甲

μ苯及微量元素加入前经0122m孔径的滤膜过滤除菌。

112　降解菌的富集和筛选

苯系化合物降解菌的富集在含有50mLMM培养基的250mL三角瓶中进行,苯或甲苯含量为

011%(VΠV)。用硅胶塞外加3层塑料薄膜密封瓶口,以防苯系化合物大量挥发。培养条件为28℃,200rΠmin。在培养过程中每4～5d从培养液中取出

通讯作者。Tel:86259222195321;Fax:86259222085376;E2mail:shaozz@1631com

作者简介:王　琳(1980-),女,山东人,硕士研究生,主要从事环境微生物学研究。收稿日期:2006204205;接受日期:2006206207;修回日期:2006206217

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