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农杆菌介导的甘蓝遗传转化

农杆菌介导的甘蓝遗传转化

农杆菌介导的甘蓝遗传转化

摘要:本实验以无菌的甘蓝种子为材料,使其在基本培养基上生长成试管苗,无菌试管苗的叶片、茎段、胚轴、子叶柄等均可做受体材料,将甘蓝组织块先进行预培养形成愈伤组织与经过活化的根癌农杆菌通过预培养、侵染、共培养、除菌、选择培养、继代培养获得具有目的基因的遗传转化植株。 关键词:根癌农杆菌,共培养,遗传转化

农杆菌共培养法最早是由Marton等以原生质体为受体建立起来的,经过一系列改进后,目前已经成为最常用的转化方法。

农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物和裸子植物的受伤部位,并导致产生冠瘿瘤或发状根。 根癌农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有Ti质粒和Ri 质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减数分裂稳定遗传给后代,这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础

1 实验材料、试剂、仪器 1.1 材料

无菌的甘蓝种子、根癌农杆菌。 1.2试剂

硝酸钾,硝酸铵,磷酸二氢钾,硫酸镁,氯化钙,碘化钾,硼酸,硫酸锰,硫酸锌,钼酸钠,氯化钴,硫酸铜,乙二胺四乙酸二钠,硫酸亚铁,肌醇,甘氨酸,VB1,VB6,VB5,蔗糖,酵母粉,NaCl,琼脂,蒸馏水,1mol/L HCl,1mol/L NaOH,卡那霉素(50ug/ml),头孢(500ug/ml),0.1%升汞,70%乙醇。 1.2 仪器设备

电子天平,烧杯,量筒,移液管,吸耳球,称量纸,玻璃棒,PH试纸,培养皿,培养瓶,超净工作台,三角瓶,封口膜,高压灭菌锅,电磁炉,微量移液器,无菌吸头,标签纸,记号笔,耐热橡皮筋。 2 实验步骤

2.1 外植体的制备

2.1.1 MS培养基的配制

第1页

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