IBDV多聚蛋白基因真核表达质粒的构建与表达

将IBDV上海超强毒株的多聚蛋白基因(vp2-4-3)克隆入真核表达载体pALTER-MAX,构建成功pALTER-MAX-VP2-4-3真核表达质粒,经纯化后,pALTER-MAX-VP2-4-3在LipofectamieTM 2000介导下转染Vero细胞、11日龄鸡胚的绒毛尿囊膜(CAM)和肌肉注射2日龄的雏鸡,1周后,分别提取细胞或

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第 1 9卷 3期 20 0 4年 6月

中国病毒学 VI 0L0G I R CA N I SI CA

1 (:2 2 2 6 9 3) 3— 3 J e 2 un 0o4

I DV多聚蛋白基因真核表达质粒的构建与表达 B 孙建和，蒋静，陆苹 2 10) 0 11

(上海交通大学农业与生物学院，上海市兽医生物技术重点实验室，上海

Co t uc i nd pr s i n fEuka yo i pr s i n as i f nsr ton a Ex e so o r tcEx e so Pl m d o

VP n f r r ln n e to sBu s l s a eVi s 2- - Ge eo y Vi e t f c i u r a e s r 43 Ve u I Di u SUN i n h“, JANG i g, LU n Ja— e I Jn Pi g

(h s tt o BoTc n lg, co lf giutr adBoo yS a ga i Tn T e ntue f i-eh oo y S h o A r l e n ilg, h n h i a o g I i o cu Jo Un v ri, h g a, 0 1 1Chn ) ie st S an h i2 1 0, ia y

Ab ta t v .. e e o ey vr ln n e t u u s lds a e vr s s an S 5 ( vBDV、wa sr c: p24 3 g n fv r iue ti fci s b ra ie s iu t i H9 v l o r s do bl n y edi e td a l n d i o e ka yo i xp e son ve t rp TER- AX y c he i e e s u ee z m g se nd c o e nt u r tc e r s i c o AL M b o sv nd . Th e omb na tpls d wa d n i e y e z m e d ge ton er c i n a mi si e tf d b n y— i si .wh c h d h tt e g s sc o d i i h s owe t a e e wa l ne h

i t A T nop L ER— AX e t rwi g t re t t n a d i e d wn t a o V r m o e o e p e s M v co t r h i n a i t o sr m f h i o o n nh e CM p o t￣T x r s ti e o h sr mbi a

te ka y tc e p e so a mi Ve o c lswe e ta s e t d wi e p a mi d a e c n u r o i x r s i n pl s d, r e l r r n f c e t t l s dsme i t n h h d

b i o e tm i e 2 0 d s e i c p o en sd t c e n t e c l y i y L p f ca n 0 0 a p c f r ti swa ee t i e l b mm u o l o e c n s y n i d h s n—fu r s e t a s a

o a t I DV n t o y -a—l c c e s ee n a u c l l i e td i te ls d f n i B a i d . d yod h k n w r it— b 2 i r m sua y n ce w t h pami r j h

p T R- AL E MAX— 243 t g sls eec l ce t e f r net n P oene pes nwa VP --.h hmu ce r ol t a wekat jc o . rti x rsi s i w ed l ei i o d tc e y i e e t d b mm u .l or s e ta s y wih a tbo y t BDV pr s i fpl s d p no fu e c n s a t i d o I n Ex e son o a mi AUr ER— AX— M V

P—— h r al t i m ba e ( 2 4 3i c o i l o cme r n o a n n CAM )o ld yo dc ik ne r owa ee tdb tE S fl— a— l h c e mb y sd tce vDo— LI A wi a tbo y t I h t n i d o BD V

Ke r s Vey vr ln n e t u u sl d sa e vr s (V BDV) v 2 4 3 g n; E k r o c y wo d: r i e t if ci s b ra ie s i u o u VI; p— - e e u ay t i e p e so a mi x r s i n pl s d: Exp es i n a d dee to r so t i n n c

摘要：将 I DV上海超强毒株的多聚蛋白基因 (p ..克隆入真核表达载体 p T R MAX,构建成功 B v 243) AL E . p L R. A T MAX. P ..核表达质粒，纯化后，A T R. X . P .. E V 243真经 pL

E MA V 243在 Lp fc miT 0 0介导下转染 V r ioet eM2 0 a eo细胞、 1 1日龄鸡胚的绒毛尿囊膜 ( A )和肌肉注射 2日龄的雏鸡， 1周后，分别提取细胞或组织中的总 D C M NA

或总 R A,用 DI N G标记探针均可检测到阳性杂交信号；转染的 V r eo细胞飞片和肌肉冰冻切片，进行免疫荧光检测均呈现阳性结果；转染的鸡胚 C AM匀浆上清，用兔抗 I DV超强毒的高免血清，经 Do—L S B t IA检测呈现阳性。 E 表明转染后基因获得表达，表达的蛋白具有免疫反应性。 关键词：B I DV超强毒；多聚蛋白 ( 2 3 VP . )基因；真核表达质粒；表达与检测

中图分类号：5 5 . 5 8 2. 6

文献标识码： A

文章编号：10—1 22 0 )30 3—5 0 35 5 (0 40—2 20

近年来由于传染性法氏囊病病毒 (net u Ifc o s i

b ra d saevrs B usl oes i,I DV)超强毒株的出现，使 u得该病的发生和流行出现了新的特点，重了对养加 鸡业的危害。管国内外对经典 I D的免疫预防已尽 B取得较大成功，但由于超强毒能突破母源抗体的保

护，传统的疫苗不能提供足够的保护，因而使 I BD的控制成为一个新的难题，亟待解决】。 对 I DV的分子病毒学的研究表明，A片段正 B链主要包括一个大的连续的开放读框 ( R ) O FA1, 编码分子量约 10 Da由 1 1氨基酸组成的前 k, 1 0 2个

收稿日期：20 .02,修回日期：20 .10 0 31-1 0 40.5+基金项目：上海市科学技术发展基金资助项目 ( 1C10 4 0J 4 3 )++通讯作者：孙建和 (9 g) 16 .,男，江苏省籍，副教授，专业为生物化学与分子生物学。 C r sodn to. T l0 16 79 3, - i snh@sueuc or p niga h r e: 2 -4 87 4Ema:uje j . . e u l t d a

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