钼锑抗比色法测定有效磷

钼锑抗比色法测定有效磷

1． 试剂配制

1.1 2,6一二硝基酚[C6H5OH (NO3)2 指示剂:0.25g 2,6一二硝基酚溶于100 mL

水中(饱和液)。

1.2 无磷活性炭

l.2.1 含磷量少的活性炭直接用0.5 mol碳酸氢钠(NaHCO3)浸24 h。在布氏漏斗

上抽气过滤，每次用少量蒸馏水淋洗多次，直至检查滤液无磷为止，然后烘干装瓶待用。

1.2.2 含磷量多的活性炭首先用2 mol/L盐酸(HCl)浸泡过夜，用蒸馏水冲洗多次后再用0.5 mol碳酸氢钠(NaHCO3)浸泡处理。

1.3 钼锑抗贮存液

浓硫酸(H2SO4) (分析纯)153 mL缓缓地倾人约400 mL蒸馏水中，搅拌、冷却。

10.0g钼酸鞍(分析纯)溶于约60℃的300 mL水中，冷却。然后将硫酸溶液缓缓滴人钼酸鞍溶液中，再加人100mL 0.5%酒石酸锑钾溶液[K(SbO)C4H4O6·1/2 H2O分析纯:，最后用水稀释至1L，盛于棕色瓶中。

1.4 钼锑抗显色剂:称1.5 g抗坏血酸(C6H8O6,，左旋比旋光度+21～ 22℃分析纯)，

溶于100 ml钼锑抗贮存液中。此液随配随用，有效期1 d。

1.5 5 mg/I磷标准液:称取在105℃烘箱中烘2h后冷却的磷酸二氢钾(KH2PO4、分

析纯)0.439 g溶于200 ml水中，加人5 mL浓硫酸(H,SO, )，转人1L容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度即为100 mg/L磷标准液，可长期保存备用。取此溶液准确稀释20倍即为5 mg/L磷标准液，此溶液不宜久放。

1.6 配制10%硫酸(H2SO4),10% 氢氧化钠(NaOH) ,

2 操作步骤

2. 1 将发酵液加人适量活性炭脱色，离心，吸取上清液2-10 mL(含5-25 ug磷)于50 mL工容量瓶中，用水稀释至20 mL，加2,6一二硝基酚指示剂2滴，用10 YO氢氧化钠或稀硫酸溶液调节pH至溶液刚呈微黄色(小心缓加，边加边摇，防止产生的二氧化碳把溶液喷出瓶口)，然后加人钼锑抗显色剂5 ml,摇匀，定容至刻度。在室温20℃-25℃下放置30 min后在分光光度计上用波长680-700 nm(红色滤光片)比色，以空白试验溶液为参比液调零点。读取数值，在工作曲线上查出显色液磷的读数，颜色在8h内可保持稳定

2.2 工作曲线的绘制

分别吸取5 mg/L磷标准溶液0,2,3,4,5,6 mL于50 ml容量瓶中，加水稀释至约20 ml，加人钼锑抗显色剂5mmL，摇匀定容，即得0,0. 1,0. 2,0.3,0.4,0.5,0. 6 mg/L磷标准系列溶液，与待测溶液同时比色，读出数值。在方格坐标纸上以测得数值为纵坐标，磷mg/L数为横坐标，绘制成工作曲线

3 结果计算

有效磷按式(C1)计算

式中:显色液磷(尸)读数— 从工作曲线上查得显色液磷的读数;

显色液体积- 50 mL;

分取倍数— 发酵液体积(三角瓶)(mL)/吸取发酵液(mL)

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