当前位置： 文档下载 > 所有分类 > 自然科学 > 生物学 > 蛋白A的固定最佳条件以及其抗体IgG纯化性能评价用一种方法自制金黄色葡萄球菌蛋白A凝胶柱,确定最佳条件,并纯化抗体IgG。
蛋白A的固定最佳条件以及其性能评价
目的：以蛋白A作配基偶联活化的Sepharose 4FF后用免疫蛋白IgG对固定后的蛋白A的性能进行验证并探究不同处理方式、不同上样方式对自制蛋白A亲和填料的利用效率，以确定最佳方案，有效提高IgG抗体的纯化。
方法：以环氧氯丙烷（ECH）活化凝胶，正交实验确定活化条件，以纯化数据确定抗体IgG纯化最佳缓冲液盐浓度，分别将抗IgG血清用不同处理方式、不同上样方式，不同上样速度进行亲和柱进行纯化，并收集纯化样品进行检测、分析，最终确定最佳方案。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
重组蛋白A；Sepharose 4FF；含有免疫抗体IgG的血清；环氧氯丙烷（ECH）；二甲基亚砜（DMSO）；硼氢化钠（NaBH4）；饱和硫酸铵（(NH3)2SO4)；磷酸盐缓冲液；0．1mol/L Gly—Hcl缓冲液(pH2．8)；
1 mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 9.0)；0.45μm滤膜。
紫外可见分光光度计；高速冷冻离心机；电泳仪；冷冻离心机；Gene5 酶标仪；Sephaeryl S-200 HighResolution 柱( S-200 柱)。
1.2方法
1.2.1蛋白A填料的制备
（1）制凝胶：取保存于20 %乙醇水溶液中的Sepharose 4FF介质5 mL（沉降体积）用蒸馏水反复洗涤，除去乙醇后置入G3烧结玻璃漏斗真空抽干5 min。取抽滤后的介质依次用20 %，50 %和70 %
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