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大肠杆菌基因组DNA的提取方式

2)实验试剂:

LB液体培养基,TE溶液,10%SDS,蛋白酶K,5mol/LNaCl,CTAB/NaCl 溶液,酚/氯仿/异戊醇,异丙醇,70%乙醇

3)实验仪器:恒温摇床、低温离心机、微量移液器、水浴锅

3、溶液配制

1)LB液体培养基:细菌培养用胶化蛋白胨10g/L,细菌培养用酵母提取物5g/L,NaCl10g/L,去离子水。

(搅拌溶解后,用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容100ml,用

20/50ml摇瓶分装5瓶,包扎好,在121℃,1.034×105pa高压下蒸汽灭菌20min.)

2)TE缓冲液:

1MTris溶液(取Tris242.2g,加ddH2O至1600ml,加热溶解)

1Mtris-HClpH8.0溶液(取1MTris溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0(需浓盐酸约8.5ml),加ddH2O定容至200ml,高压灭菌备用)

TE缓冲液(10mMTris-HCl1MmEDTApH=8.0,1MTris-

HClBufferPH=8.05ml

0.5MEDTAPH=8.01ml向烧杯中加入约400mlddH2O均匀混合;将溶液定

容到500ml后,高温高压灭菌,室温保存)

3)蛋白酶K:(20mg蛋白酶K溶于1ml无菌双蒸水,-20℃备用)

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