影响HIV抗体初筛检测质控因素的分析_王松菊

#702#中国皮肤性病学杂志2006年11月第20卷第11期 ChinJDermVenereo,lNov.2006,Vo.l20,No.11

#检验技术#

影响HIV抗体初筛检测质控因素的分析

AnalysisoftheQualityFactorforInfluenceAnt-iHIVPrimaryElection

王松菊

WANGSong-ju

[摘 要] 目的 为提高AIDS初筛实验室检测质量,最大限度地减少HIV抗体检测可能出现的错误和误差。方法

采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)和免疫层析快速诊断试剂(金标法)测定血清中的HIV抗体。结果 经重复试验和确诊试验,其假阳性率分别为30.0%和22.2%。结论 需严格控制实验条件,提高实验准确率。

[关键词] AIDS初筛实验室;HIV抗体;检测质量

[中图分类号] R446 [文献标识码] B [文章编号] 1001-7089(2006)11-0702-01

近年来,中国艾滋病流行已进入快速增长期,专家估计艾滋病病毒(HIV)感染者人数达100万,其中近70%为静脉注射毒品途径感染[1]。目前诊断HIV感染者和艾滋病(AIDS)患者的主要依据是检测特异性HIV抗体。AIDS初筛实验室是艾滋病的监测哨点,特别是强制戒毒所,其检测对象为吸毒人员,属于性病、艾滋病感染的高危人群[2],其结果的正确性直接影响着受检者个人及其家庭成员、医务人员,甚至社会的安全性。为进一步提高AIDS初筛实验室检测质量,最大限度地减少HIV抗体检测可能出现的错误和误差,现将几年来检测工作中发现的有关影响HIV抗体初筛检测质量的因素进行分析。1 资料和方法

1.1 一般资料 自1999~2004年本市戒毒所收治的758例强制戒毒人员,全部符合DSM-Ó-R阿片类药物依赖诊断标准[3],男565例(74.54%),女193例(25.46%),年龄13~47岁,平均28.06?10.06岁。吸毒时间0.5~6年,平均2.9?1.2年。有静脉吸毒行为的496例(65.44%)。

1.2 检测方法 按照5全国艾滋病检测工作规范6,采用珠海丽珠试剂有限公司生产的双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)和ACONHIV胶体金免疫层析快速诊断试剂(金标法)测定血清中的HIV抗体,阳性标本按程序送确认实验室确诊。质控样品含有HIV抗体阳性、阴性标本,标本OD值\Cutoff(临界值)为阳性,Cutoff值因试剂不同而有差异,一般Cutoff值为0.12~0.15加阴性对照孔OD均值。2 结果

检测结果见表1。实验数据表明,两种方法均存在着一定的假阳性率,特别是ELISA法。3 讨论

两种方法检测存在的假阳性除试剂本身灵敏度较高外,重复性差,还受检测人员、标本采集和处理的方式、诊断试剂、仪

[作者单位] 浙江省金华市安康医院,浙江金华 321019

[作者简介] 王松菊(1963-),浙江省东阳市人,医学学士,主管检验师,主要从事性病、艾滋病检测器、实验室环境等综合因素的影响。

表1 758例强制戒毒人员两种方法检测结果 例

方法ELISA金标法

检测数758758

阳性数159

重复试验阳性数

109

确认试验阳性数

7

7

假阳性率(%)30.022.2

3.1 实验室技术人员因素 由于操作人员对更换的新试剂性能不熟悉,事先未做预试验,震荡混匀力度控制不当,使阴性的标本呈假阳性。另外加样器吸头与加样器不匹配,导致加样量不准确。加样量太少不仅使敏感性下降,还容易产生较大的误差,加样量大可以在一定范围内提高敏感性,但也可能使特异性下降。同时加样时注意勿碰板底,以免擦掉抗原。在实验中有为求快而使反应时间不够和温度不合适,从冰箱中拿出试剂不经预温直接使用导致错误的结果。抗原抗体反应需要一定的时间,在酶联免疫吸附试验(ELISA)测定中,由于抗原或抗体被包被在固相表面,抗原抗体反应只能在固相表面进行,远离固相表面的物质要靠浓度差的改变缓慢地加入反应,在操作时一定要使各步反应达到足够时间,不要片面追求快出结果。检测前应使试剂盒和标本均达到室温,加入冷的试剂或未完全融化的标本有可能导致错误的结果。在孵箱的温盒内温育时,要注意温盒内的温度是否达到了孵箱显示的温度。忽视内部和外部质量控制:不同的试剂盒内部对照成立条件不同,一旦实验结果不符合这些具体条件,应检查出现问题的原因,重新进行检测。如某公司生产的诊断试剂,要求阳性对照OD值\0.8,阴性对照OD值[0.1,两项均值之差必须\0.8时,实验有效,上述三个条件只要有一项不符合就应视为无效。且若阳性对照孔间之差大于30%,应重复试验。外部对照是为了监控实验重复性和试剂盒稳定性而由实验室自己制备的对照,观察临界值对照的动态变化是监控每一次检验和各批检验之间变化的一种方法,检验过程中十分微小的变化可引起临界值对照的偏移而引起人们的注意。

3.2 采集和处理标本的方式 样品质量的好坏直接影响到检测结果的准确,血清标本尽量要清亮,无溶血,无污染,无过多脂质,避免反复冻融。本实验室曾出现过由于血清被污染而使阴性标本出现假阳性。

3. 所有的值

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