分离植物内生真菌操作流程

1.材料准备：植物样本、剪刀、镊子、70%乙醇、3%次氯酸钠（本实验用4%84）、

酒精灯、计时器、平板、锥形瓶，无菌水，离心管（带盖，灭菌）、打开无菌操作台灭菌30min。

（1）植物样本的采集：选取生长状态良好，不要有病斑或者枯枝烂叶，每种植物采取三株标本，要带有叶子、叶柄和枝条及其他部位，将样本名字写在

小纸条上放在装标本的袋子里，采下来的标本与写有名字的纸条一同拍照，样本上有脏东西时，请用纸轻轻擦掉，若不清楚植物名字，请将整棵植物

拍照留用于鉴定，并做好相关记录。

（2）制作PDA固体培养基，在无菌操作台中倒平板，每瓶250ml的培养基大概倒15个板，待其凝固后用于接种。

2.清洗：认真用清水将标本洗净，洗去标本表面的灰尘，去除枯叶，备用。

3.取样：

（1）在叶片的左上、右上、左下，右下和正中五个部位进行取样，剪取5mm*5mm的叶片，如果是叶柄或枝干，则剪取5~10mm，若是比较

粗的枝干或圆圆的果实之类的，总之比较大的，则将它切开，再剪取

样本，样本不要剪的太大或太小。

（2）每种植物的叶子，叶柄，枝干等其他部位，每种部位接种两块板，大板每个要接种五个样本即左上、右上、左下，右下和正中，小板每个

接种四个样本即左上、右上、左下，右下，计算好所要剪的样本数，

尽量多剪几个，以免后面的表面灭菌中冲洗时被冲掉。

（3）若植物标本有剩余，且是没有洗过的，重新装好，放到冰箱里，备用，洗过的扔掉。

（4）每种植物标本所剪的样本放在一个50ml的离心管中，放在试管架上，并且每个离心管上要标好所对应的植物标本。

4.表面灭菌：在无菌操作台中进行

（1）先向各离心管内倒入适量（10~20ml）70%乙醇，拧紧盖子，用计时器开始计时1min,每10秒钟晃动离心管几次，使其充分灭菌。

（2）1min后，拧松盖子，将乙醇倒入事先准备的锥形瓶中，注意不要将管

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