实验四 麦清蛋白的初步提取

实验四 麦清蛋白的初步提取

生物111杨明轩1102040128

一、研究背景及目的

蛋白质不仅是生物体中的重要大分子，在实际的生产生活中也有广泛应用。在科研中，研究生物的新陈代谢、揭示基因与表型的关系的机理，都涉及到蛋白质的氨基酸序列和结构分析，要进行这些工作首要步骤就是提取和纯化蛋白质。提取得到的蛋白质可被人们广泛应用，如小麦蛋白，其含较多的赖氨酸、色氨酸和甲硫氨酸，营养平衡较好，其含量与改善面包和面条的品质很有关系

而蛋白质的分离纯化是科学研究和商品化开发的重要环节。针对某一特定目标产物的分离纯化要以其自身独特的性质为依据。但随着对产物纯度要求的提高，同一类物质之间相似的性质使得进一步精细分离难度加大，原有技术的不足也就逐渐体现出来。针对这一矛盾，人们以差异转化为思路，在一定条件下，将大分子理化性质的细微不同转化成移动速度的差异，并通过移动距离的积累，实现大分子的精细分离。其中，层析技术凭借着独特的优势始终占据着生物大分子纯化的主导地位。根据分离要求的不同，层析技术可以分为分配柱层析、纸层析、薄层层析、离子交换柱层析、凝胶过滤层析、亲和层析、高效液相色谱等。这些技术利用了生物大分子的各种理化性质，有相似性但又各有区别。

本实验的目标在于用利用分子筛层析完成麦清蛋白脱盐，在实验的过程中验证层析技术的可行性，体会使用层析技术分离提纯的原理和步骤，并由此对新技术的开发思路、理论与应用的良好结合、新技术的发明对生物学相关研究和实验的重要作用等方面的内容有更感性的认识。

二、实验原理

1、盐析技术

本实验计划用小麦种子制得的浸出液，在在这一步中，我们可利用蛋白质的盐析现象，即盐浓度达到某一界限后，蛋白质的溶解度随盐浓度升高而降低。通过在混合液中添加一定浓度的中性盐，使蛋白质从溶液中析出沉淀，从而可以使蛋白质与杂质分离。本实验中使用硫酸铵。

2、层析技术的基本原理

层析技术的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用。由于混合物中各物质理化或亲和性的差异，在层析过程中表现为移动速度的差异，这种差异经过适当的足够长及距离的积累，将各种物质分离开来。

3、凝胶过滤层析（分子筛层析或分子排阻层析）的原理

凝胶过滤层析又称分子筛层析，是利用固定相内一定大小的网孔对相对分子质量不同的组分的阻滞程度不同而进行蛋白质分离的层析技术，可用于蛋白质的分离纯化，也可用于蛋白质的脱盐。将蛋白质样品加在柱床表面，当用缓冲液洗脱时，比凝胶珠网孔大的蛋白质不能进入凝胶珠内部，只能从凝胶珠的间隙里通过，受到的阻滞作用小，经过的路径短，先被

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