单链抗体表达研究进展1

噬菌体抗体库,单链抗体,筛选scfv

医学杂志 20 09年第 2 5卷第塑 [ 2 aa A, 2]K y R A d Y yi . n M d e oi d i f ( )2 8 2 7 2:0 - 1 .

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t e s r i a ma a e n o u a u s h u gc l n g me t f l mb r b r t

ta s e i u a a p o c f r h s r i a r n p d c l r p r a h o t e u g c l te t n o s v r t o a o u n a o r a me t f e e e h r c l i b r r

[ 3 ai c kA,B ra P u z kP t 2]M c j a ez a s,D di ,e n a a. 1 P se i r e h l c r e t my o t ro k y o e o p c o wih t p r u a e u e il c e tb l a i n i e c t n o s p d c e s r w sa ii t n z o

f c r[] N uo r r,0 7 0 4 r t e J . e r ug y 2 0,6 ( au s s e S p l ) 2 2 2 1 dsu s n 2 1 2 2 u p: 3— 4; i si 4— 4 . 2 c o

l b r u t r t e J . p e 2 0, u a b r a u s[] S i,0 4 4 m sf c r n

(收稿：0 8 0— 8编辑： 20—7 0徐荣远 )

单链抗体表达研究进展 邓亮综述舒建昌审校

. 3单链抗体 (ig—hi n bd因区 .使外源多肽或蛋白质表达并展示 1腺病毒载体腺病毒由于其基因结 s l can a t o y ne i构、功能清楚，于制备、化、易纯浓缩，宿 f g e t cv由抗体重链可变区和轻于噬菌体表面，进而通过亲和富集筛选 r m n .sF ) a

感理不链可变区通过 1 5~2 0个氨基酸的短肽表达有特异肽或蛋白质的噬菌体，并得主范围广、染率高、化性质稳定、 N (n e) 1 kr连接而成。目标特定的 sF i在 c v上到大量富集，然后进行 D A序列测定。整合宿主基因组、遗传毒性和免疫毒性 d d表分子结合活性与噬菌低的特点。 A 2和 A 5是目前应用最广连接放射性核素、生物毒素、物，药将极它将基因型、型、 el y等 1 0 大增强对靶细胞的杀伤能力。 atr K nc等…体的可扩增性结合在一起，是一种高效的两种腺

病毒血清型。H de l将腺病毒和 5 6 FsF 6 F— v重组，并转染 2 3/ c 9T研究发现将个体基因型 sF c v和细胞因子的筛选系统[ 。 目前常用的噬菌体载体为 p o b 1 H Cm 3 7C O细胞 (中国仓鼠卵巢细胞 )发现，粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子或免疫 6 F— v准确转染人 C O细胞并且获 c H刺激肽组成融合蛋白，是一种有效治疗及 P atb,组成噬菌体抗体 (h g 5 6 FsF cnal f p ae 淋巴瘤的疫苗。Wag等_通过抗脱氧雪 at oy库 .中每一个噬菌体在其表面稳定表达。 n 2 _ ni d )库 b Fb或 sF )由 2表达载体受体 cv。腐镰刀菌烯醇 ( O和抗单端孢霉毒素可表达一种特异性抗体 ( a D N) sF c v的表达载体受体多种多样，有 ( E sF因融合，表达为抗 D N和于噬菌体抗体既可以识别相应抗原并与 Z N)cv基 O抗 Z NsF .结果显示双功能抗体成功其结合 .能够感染宿主菌进行扩增， E cv又重细菌、真菌、动物细胞 ( O C S细胞、 H C O细昆虫细胞 )植物细胞等。、 构建 .并可应用于 D N和 Z N检测。 O E 复“附一脱一吸洗扩增”程，筛选容量胞、过可 sF c v表达是 sF c v制备的关键步骤。为 18以上的噬菌体抗体库。 0 最常用的表达受体为大肠杆菌 ( . E o )大肠杆菌作为表达受体表达具有生 i将基因通过表达载体整合入受体宿主基 L e等 l利用噬菌体表面呈现技术 cl, e 6将 A SC V易于操作、转化和转导效率高，可因内，依靠宿主的转录和翻译系统，c v和抗体库技术 . S R—o蛋白免疫小长快速、 sF片断完整表达于产物中。本文将就 sF 鸡后 .提取脾 B淋巴细胞 5×1克在短时间内大规模地生产抗体蛋白，于 cv 0个便表达技术及其进展做一综述。 隆。轮 P n ig淘筛、脱、数 a nn洗富集后，抗纯化、分析和应用。然而，大肠杆菌不能对 1表达载体体数量增加 1 0倍，现独特 sF表达噬重组抗体进行翻译后的糖基化、酸化修发 cv磷常用的 sF表达载体包括：质粒载 菌体和噬菌体表面呈现系统结合可以提饰，

能完成多聚体的组成和二硫键的形 cv不体、噬菌体载体、腺病毒载体等。 成。在植物中表达的 sF c v通常称为植物高 sF c v的产量和亲和力。 11质粒载体 .质粒 (ls d是以超螺 pami)

Ha aai m sk等报道了一种新改进的抗体 (l t oy Beeo pa i d ) rr n等l] nb t l通过基因 1 改进 i m ng1 m u oe Wetna表达大鼠胸腺表面 C 4和 s i能 o D

旋状态存在于细菌细胞质中的一种能够免疫胶体分子筛技术 (m u oe—枪轰击转基因商业小麦 Wet i, i m ngl s na o自主复制的遗传成分，多以共价闭合环 b pn ig。新 i a n ) o n 状的 D Afoaet l e i ua N N vln yc sdc c l D A) c l o r r

b p n ig术有两个特征： 1 i an技 o n ( )在蛋白 C2 D 8两种 sF . c v成熟的种子保存 1后年分子形式存在l。 质粒载体借助于物理或电泳后进行胶体切片， 3 l使用 imu olt sF m n pa s c v仍保持较高活性。转基因种子提取 e化学的作用导入细胞内，据质粒在宿 ca将不同片断带的蛋白洗提；2通过的 sF具有内毒素污染小、易于纯化和依 ot e () cv主细胞内是否具有自我复制能力分为使用噬菌体克隆作为探针，产物对目标收集。P t u _]药用植物喀西中 ua n等 l l 2针对整合型和附加体型两种。Jrd等…以分子的敏感性的检测经生物学放大可以的药理活性成分澳州茄碱糖苷 ua o Sg一4依赖的分解性 T L质粒为表达 极大提高。 i 5 ma O (oao i l oi s slsdn g cs e )制备了单克隆抗 e y d载体， M1在 3噬菌体文库中表达的 sF cV A f e Mar u r u等报道了一种新型胞体，过载体转化发根农杆菌插入 R质 d通 i含量增高且与受体结合活性增强内的抗体文库筛选系统，这些经选择后粒 T D A中感染喀西茄植株，诱导 sF—N cv

1噬菌体载体噬菌体表面呈现展示的 sF . 2 c v能够在还原环境下保持稳定，并在毛状根表达。 技术 (h g i l c nq e) p aeds a t

hiu s,是近年 且无论在细胞内还原环境还是细胞外的 3基因转染技术 pye来建立和发展的利用噬菌体表达外源基正常环境下都表现出较高的生化稳定基因转染技术主要有磷酸钙共沉淀

因的一项新技术。它以改建的噬菌体为 性、可溶性、抗原识别能力。 载体，将编码外源肽或抗体可变区的

技术、电穿孔方法、质体法。脂

E ai m d等将噬菌体表面呈现展示 31磷酸钙共沉淀技术将氯化钙、 . D A片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基技术和原子动力显微镜 (tmcfre R A( D A) N a i oc o N或 N和磷酸缓冲液混合，沉淀 m cocp )生物筛选技术结合成一种新形成包含 D A且极小的不溶的磷酸钙 irso y N的生物淘筛技术，仅使用最小量的目标颗粒。磷酸钙一 N D A复合物黏附到细胞膜 作者单位：1 2 0广州市红十字会医 502 院消化内科

抗原，就能够筛选特异性结合 O—并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉 t淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成 sn c i y ul n的 sF。 e c v

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