徐长卿多糖的分离纯化与化学结构研究_

多糖结构

#中药及天然药物#

徐长卿多糖的分离纯化与化学结构研究Ñ

王顺春 方积年

(上海200031中科院上海药物研究所)

摘要 目的:研究中药徐长卿中一种葡聚糖的化学结构。方法:采用柱层析进行分离纯化,并用甲基化分析和13C-NMR等方法阐明多糖CPB-2IG的化学结构。结果:该多糖分子量为117@104,由单一葡萄糖组成,比旋度为+15912。,构型为A型,单糖的连接方式为1,6连接。结论:CPB-2IG的化学结构为直链A-D--(1y6)葡聚糖。关键词 徐长卿;多糖;化学结构

Studiesonseparation,purficationandchemicalstructureofapolysaccharideinCynanchumpaniculatumWangShunchun(WangSC),FangJinian(FangJN)(ShanghaiInstituteofMateriaMedica,Shanghai200031)

ABSTRACT

OBJECTIVE:TostudythechemicalstructureofapolysaccharideinCynanchumpaniculatum(Bunge)

Kitagawa1METODHS:SeparationandpurificationweredonebyDEAE-SepharoseFFandSephadexG-200columnchromatographicfractionations;methylationanalysisand13 C-NMRwereusedtodeterminethechemicalstructure1RESULTS:Themolecularweightwasestimatedtobe117@104anditsspecificratation[A]D=+15912。,itsconfigurationisA1Themodeloflinkageis1,6linking1CONCLUSION:Thispolysaccharideisalinearglucanwith1,6linkages1

KEY WORDS Cynanchumpaniculatum(Bunge)Kitagawa,polysaccharide,Chemicalstructure

徐长卿为萝摩科草本植物[Cynanchumpanic-ulatum(Bunge)Kitagawa1]具解毒消肿,祛风止痛,温经通络之功能。临床上多用于抗菌消炎,活血化瘀,理气止痛[1]。过去的研究表明,它主要含有牡丹酚,多种苷元及黄酮氨基酸等。我们以徐长卿全草为起始物,经水提和碱提,并经各种柱层析得到多个多糖组分,初步药理试验表明这些多糖具有一定的免疫促进作用。具有免疫活性的多糖其衍生物常常还具有其它的活性,如硫酸化多糖具有抗HIV活性[5]及抗凝血活性[6],羧甲基化多糖具有抗肿瘤活性。本文对其中一个葡聚糖CPB-2IG的分离纯化与化学结构进行了研究。实验证明,该多糖具有一定的免疫活性。1 材料与仪器

徐长卿(经我所生药组鉴定为[Cynanchumpaniculatum(Bunge)1Kitagawa1];T-系列标准葡聚糖为Pharmacia产品,各种单糖标准品为Fluka产品。纤维素板为Merck产品,其余均为国产分析纯试剂。HPLC的泵为BIO-RAD1330型,柱为ShodexKS-805sugarcolumn,示差检测仪为ShodexSE-51;气相色谱柱5%OV225/AW-DM-CS-ChromosorbW(80-100mesh),柱长113米;GC-MS分析温度为170e。旋光度用W22-15型自动旋

,[7]

[2~4]

光仪测定。

2 实验方法

211 样品提取 徐长卿生药(4kg)经粉碎后乙醇回流脱脂,残渣干燥后先用沸水提取至硫酚法检测无糖反应,然后再用5%NaOH于4-10e下浸泡过夜。提取液经中和,浓缩后用三氯乙酸脱蛋白,透析,醇析,复溶于水,再次醇析得多糖粗品。

212 分离纯化 取碱提多糖粗品溶于水,DEAE-SepharoseFF柱层析(水y2mol#L氯化钠溶液依次阶梯洗脱),硫酚法检测。根据洗脱曲线收集(图1)。取B峰经透析,浓缩后再上SephadexG-200柱,水洗脱得到CPB-2IG。213 分子量及纯度检测 根据魏远安等[8]报道的方法,CPB-2IG和各种标准多糖用01001mol#LNaOH配制成溶液进行检测。

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214 单糖组成的测定 CPB-2IG(5mg)经2mol#-1

L三氟醋酸(TFA)100e封管和水解6h,蒸干去除TFA,H2O(1ml)溶解,点样于5cm@10cm纤维素板上进行薄层层析。点样量100Lg,展开剂为乙酸乙酯-吡啶-醋酸-水(5B5B3B1),显色剂为苯胺二苯胺;剩余物用硼氢化钠(20mg)室温还原3h,然后加入冰醋酸和甲醇反复多次蒸干。干燥后加入醋酐于120e乙酰化2h。加甲苯蒸去醋酐,氯仿萃取,水洗

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