玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织安全性研究进展

近年来玻璃化冷冻技术逐渐应用于生殖医学,多数学者认为,玻璃化冷冻胚胎的存活率、发育率、种植率和妊娠率高于程序化冷冻,且经济、便捷、快速,有取代传统慢速冷冻技术的趋势。但玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织历史短,其安全性一直受到关注,并认为其造成的细胞膜、透明带、遗传物质和代谢功能损伤是不可避免的。但选择不同的冷冻保护剂和冷冻载体对不同时期的胚胎、配子、卵巢组

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国外医学计划生育/生殖健康分册 20 0 7年 2 6卷第 4期

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综述 生殖医学 (助生殖技术 )辅

玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织安全性研究进展 安徽省立医院生殖医学中心 ( 3 0 1郑圣霞综述 200 ) 摘要

刘雨生审校

近年来玻璃化冷冻技术逐渐应用于生殖医学，多数学者认为，玻璃化冷冻胚胎的存活率、育率、发种植

率和妊娠率高于程序化冷冻，且经济、便捷、快速，有取代传统慢速冷冻技术的趋势。但玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织历史短，其安全性一直受到关注，认为其造成的细胞膜、明带、并透遗传物质和代谢功能损伤是不可避免的。但选择不同的冷冻保护剂和冷冻载体对不同时期的胚胎、配子、卵巢组织进行玻璃化冷冻所造成的冷冻损伤不同。因此， 寻求一种安全可靠的冷冻方法是生殖医学工作者追求的目标。 关键词玻璃化冷冻胚胎配子卵巢组织损伤

玻璃化冷冻鼠胚胎首次成功后，技术逐渐用该

化冻融牛囊胚，现所有囊胚腔内均未见冰晶形成，发

于人类卵子、早期胚胎、胚冷冻保存。目前多数囊学者认为，璃化冷冻胚胎存活率、育率、植玻发种率、妊娠率方面明显优于程序化冷冻，且经济、便捷、速，玻璃化冷冻技术有取代慢速冷冻技术快故 的趋势。但玻璃化冷冻人类胚胎、子的历史毕竟配

均完全玻璃化， 1但 6步法平衡囊胚质膜上只有轻微超微结构改变，而 2步法平衡囊胚上有多处小囊形成和明显微粒外膜聚集。O bsi h oh等研究也发现，将孵育后囊胚直接投入玻璃化冷冻液 ( 1步法 )可产生微粒丢失，胞质膜破裂，细线粒体改变，胞质内网状组织肿胀，细胞核及其连接结构未受到损害。但将孵育后胚胎放人 1%E中平衡 5 i投入玻璃化 0 G mn再冷冻液 (法 ) 1步法产生的损伤更小，经 2 2步比且 步法冻融体外孵育 1存活胚胎中， 8h后有些胚胎结 构重新恢复到原来的状态，有些胚胎出现严重的损

很短，安全性一直受到关注，文就近年来玻璃其本 化冷冻技术冷冻胚胎及配子的安全性研究综述。 玻璃化冷冻损伤因素

高浓度冷冻保护剂和低温会对配子、胚胎及卵巢组织造

成化学和物理损伤。化学损伤是指冷冻保护剂的细胞毒性作用；物理损伤是指细胞内水份在降温时形成冰晶对细胞膜、细胞器的机械性损伤，降温、以及 复温时细胞内外渗透压改变而造成的渗透 l损伤。生故需对冷冻保护剂和降温复温速率进行优化。 玻璃化冷冻保护剂及载体的选择快速降温有利于玻璃化形成，以为提高热传所导性采用各种载体，主要有麦管、细麦管 (放、拉开 封闭 )拉细玻璃管、环、、铜尼龙环、电子显微镜栅以及无载体微滴法；常用细胞内冷冻保护剂有：甲二 基亚砜 ( MS、油、 D O)甘丙二醇 ( R H)乙二醇 ( G) PO、 E

伤，能重建囊胚腔结构。表明玻璃化冷冻能损伤不这牛胚胎细胞膜结构，且损伤程度和性质依赖于玻璃 化冷冻步骤。 Moe a a i a等 _在扫描电镜下比较牛桑葚 ri l r d sv 4]

胚或囊胚经慢速和玻璃化冷冻融解后培养 2 4 4和 8 h 形态学方面的改变。发现胚胎直径无明显不同，但 3组间胚胎透明带外表小孔直径明显不同 (< .5。 P 00 )对照组是 (. _ . 25 l慢冻组 (,± . 0 ) m, 0 80 0 ) m, 4+ 0￣ 0 4 o 0 l 3 0 7￣玻璃化组 ( .+ . 06 m,对照组和玻璃化组 0 7 00 ) 2 0且透明带外表小孔数目也有统计学差异 (< . )分别 P05, 0

等，细胞外冷冻保护剂有蔗糖、藻糖等。多数学者海认为 E G加上大分子糖类是最广泛使用的比较理想的冷冻保护剂[。 3 3

是 4 .+, 3.+ .。认为透明带外表小孔直径 5 73和 82 8 4 2 变小、目减少对抵抗病原菌入侵有利，数但对胚胎从

外部摄取营养物质有害，其对培养 4胎更有尤 8h胚害。以此解释培养 2,8并 4 4 h胚胎存活率不同，速慢 冷冻组、璃化组、照组分别是：4h3%,7 玻对 2 9 2%, 9 0%; %, 4,%。 48 h35 1% 65

玻璃化冷冻损伤即安全性的研究现状 一

、

细胞膜及透明带损伤

早期 K w ym u aa a等研究 2 .%甘油加 2 .% 25 25 P O 6步法和 1%甘油加 2% P O R H1 0 0 R H 2步法玻璃 基金项目：安徽省教育厅自

然科学基金资助项目(编号：06 J 7 C 20 K04 ) 收稿日期：0 6 1— 7修回日期：0 7 0—1 20— 10 20— 3 9

B oksl¨究玻璃化冷冻操作对体外成 on uo等 5]研熟水牛卵子发育及超微结构影响，认为分别用 3%,0 5 4%的 E G作冷冻保护剂，固体表面 (S、 S V)麦

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