实验4.3叶绿体中色素的提取和分离

实验4.3 叶绿体中色素的提取和分离

一、实验目的：

提取和分离绿叶中的色素

二、原理：

1、叶绿体中的各种色素能够溶解在有机溶剂中

2、叶绿体中的各种色素随层析液在滤纸上的扩散速度是不同的

实验材料：

新鲜的绿色叶片

三、实验仪器和试剂：

干燥的滤纸、带塞大试管、研钵、剪刀、漏斗、脱脂棉、无水酒精、层析液等

四、实验方法：

1、提取绿色叶片中的色素

加入少许石英砂和碳酸钙，分次加入总量为5毫升的无水酒精充分研磨

2、制备滤纸条

前去两角

3、画滤液细线

细直的滤液线，重复三次

4、分离叶绿体色素

滤纸条顶端浸入层析液，滤纸线不能浸入层析液

5、观察色素条带

色素分布情况

6、填写实验报告

五、分析和讨论

光合色素的种类及作用：

胡萝卜素：---橙黄色 吸收蓝紫光

叶黄素：-----黄色 吸收蓝紫光

叶绿素a：---蓝绿色 吸收红橙、蓝紫光

叶绿素b：---黄绿色 吸收红橙、蓝紫光

学生应注意哪些问题？ 提取光合色素过程中，关键是速度。提取光合色素过程中，因为光合色素都是脂溶性的，因此用无水酒精这种有机溶剂作为提取液，因为无水酒精易挥发，因此提取过程要快，同时提取液要用胶塞塞好，以防止其挥发；

利用二氧化硅硬度大的特点，其粉末可增加研磨时磨擦力，加快研磨的速度；

又因为叶绿素容易破坏，因此需要保护，而碳酸钙的作用是防止叶绿素被破坏；把绿叶剪碎的目的也是为了加快研磨速度。

划滤液细线是本实验的结果明显清晰的关键。滤液细线必须待第一次完全干燥后才能划第二遍，重复次数可多一些，滤液细线要齐、细、颜色深，其中齐更重要一些。

用纸层析法分离色素时，特别要注意滤液细线一定要处于层析液的上面，否则光合色素会溶解于层析液中，而不会沿层析液向上扩散、分离，这会使实验效果极差，甚至不发生分离，导致实验无效；另外，层析液是石油醚、丙酮、苯等有机溶剂的混合液，具有挥发性且有毒，要注意密闭。 正常的实验现象从上到下应为：胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素（a）、叶绿素（b），一般可看到下面三种色素，最上面的胡萝卜素如果操作不适当效果可能不很明显。

在学生实验时，老师可让学生设计一些其他的色素层析的方法，活跃学生的思维。

学生实验结束后，教师可给学生演示叶绿体的色素吸收光谱的现象。方法是：用红、橙黄、绿、蓝紫色的薄膜，分别遮住同一光源。把盛有叶绿体的色素提取液的试管，分别放在红、橙黄、绿、蓝紫色光前、让学生观察这些光透过色素提取液的情况。可明显地看到红和蓝紫色光透过的较少（暗），橙黄和绿色光透过的较多（亮）。引导学生分析这些现象，得出叶绿体中的色素，主要吸收红光和蓝紫光。在此基础上，出示教材中的光合色素吸收光谱曲线，引导学生分析曲线含义，总结光合色素吸收光波的不同特点。

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