植物生理指标测定的实验方法简介

失重率测定,叶绿素测定,还原糖测定,丙二醛(MDA)含量测定,超氧化物歧化酶(SOD)活性测定,过氧化物酶POD活力测定,多酚氧化酶PPO活力测定,过氧化氢酶CAT活性测定

1. 材料与方法

1.1 材料处理

生菜，选取整齐、质地脆嫩、颜色翠绿或深绿，且无腐烂、无虫食的作为实验试材。适当剥去外部一些受损苞叶，使其大小整齐一致，将生菜用0.02%次氯酸钠浸泡3min,晾干水分后，五棵作为一个实验组，用塑料袋包装，分别在-4℃，0℃，4℃以及室温下贮藏。每隔2d测定一次贮藏生菜的生理指标，贮藏期间相对湿度为70%。

1.2实验使用的化学试剂

碳酸钙粉（石英砂），80%的丙酮；1mg.ml-1葡萄糖标准液，3，5-二硝基水杨酸试剂；去离子水；0.6%的硫代巴比妥蒜（TBA），10%的三氯乙酸（TCA）;0.2mol/LPH=7.0的磷酸缓冲液,0.1mol/L H202溶液; 0.05mol/L PH=7.8磷酸缓冲液, 提取介质（0.05mol/L PH=7.8磷酸缓冲液，内含质量分数为1%的聚乙烯吡咯烷酮）,130mmol/LMet溶液, 750umo1/L NBT溶液, 100umol/L EDTA溶液，20umo1/L核黄素，蒸馏水；质量分数2% H202溶液，pH5.5磷酸缓冲液，0.05mol/L愈创木酚，20%的三氯乙酸（TCA）0.1mol/L儿茶酚；

1.3实验的仪器设备

天平，分光光度计，水浴锅，离心机，研钵，打孔器，烧杯，容量瓶，移液管，试管，漏斗，滤纸，光照箱，培养箱，冰箱，电导仪，

1.4实验方法

1.4.1失重率

采用差量法计算。失重率（%）=(入贮前重量一贮藏后重量)/入贮前重量×100%

1.4.2叶绿素含量

叶绿素含量的测定采用分光光度比色法[1]。取0.5g生菜叶片研磨，加少量的碳酸钙粉及80%丙酮进行研磨，匀浆过滤后用80%的丙酮定容至15ml，以80%的丙酮作对照，在分光光度计上测定665nm,649nm, 470nm处的光密度值。以Amon法公式计算叶绿素的含量。

色素的浓度(C) 提取液体积 稀释倍数

样品鲜重(或干重)叶绿素总量（mg/g）=

1.4.3还原糖含量

采用3,5一二硝基水杨酸(DNS)比色法。称取生菜叶片样品1g，加8mL蒸馏水匀浆，10000rpm离心20min，吸取上清液2.0mL，加1.5mL的DNS试剂，沸水中煮5min,冷却后蒸馏水用定容到25.0mL,测A540。以葡萄糖作标准曲线并计算还原糖含量。

1.4.4电导率测定

用打孔器取10片6~8mm的生菜叶片，用自来水冲洗数次，再用去离子水冲洗，然后用50ml的去离子水加盖浸泡1h, 测电导率S1，（以蒸馏水为空白对照组。煮沸1~2min，静置1h，再测电导率S2。相对电导率L=S1/S2.）。

1．4.5丙二醛(MDA)含量

采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法。取生菜叶片样品1g加入2mL 10% TCA和少量石英砂,研磨，再加8ml TCA进一步研磨，匀浆液4000r/min离心10min。取2mL上清液，加2ml质量分数为0.6%TBA溶液，沸水中煮15min，冷却后离心，取上清液测定450，532和600nm波长下的吸光度值，以TCA溶液取代酶液作为空白。根据公式

MDA质量摩尔浓度(umol . L-1)= c . N. W -1

计算出MDA浓度及生菜样品中的含量

1.4.6超氧化物歧化酶(SOD)活性

取生菜样品0.5g，加入6mL 提取介质（0.05mol/L PH=7.8磷酸缓冲液，内含质量分数为1%

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