拉曼光谱法检测果蔬中的类胡萝卜素实验方案
拉曼光谱法检测果蔬中的类胡萝卜素
一、实验目的
1. 熟练掌握拉曼光谱分析法的原理及应用。
2. 利用拉曼光谱法和RP-HPLC法检测果蔬中的类胡萝卜素。
二、设计思想与实验原理
类胡萝卜素是自然界广泛存在的一类天然色素的总称,包括胡萝卜素和叶黄素两大类。类胡萝卜素具有多种生物活性,它们广泛存在于微生物、植物、动物及人体内,是生物体必不可少的组成成分。常见的有虾青素、β-胡萝卜素、番茄红素、角黄素、玉米黄素等。
已明确结构的类胡萝卜素有600余种,其中由8个类异戊二烯组成,碳原子数为40的四萜占多数。类胡萝卜素具有活泼共轭双键体系,有特征的紫外可见光吸收和拉曼响应。
类胡萝卜素具有重要的生物学功能,作为强抗氧化剂,能高效猝灭单线态氧;参与执行光能传递和物质转化、抗光敏化作用,是光合生物必不可少的组分;此外,它们对人类有重要的保健防病功能,如清除自由基、免疫调节、防治眼病、抑制肿瘤或抗癌等。但是直到现在,人们对类胡萝卜素的生物学功能和机理并未完全了解。为了能在类胡萝卜素研究中获得可靠和有价值的结论,测定类胡萝卜素组成,获得可靠的资料变得非常必要[1,2]。
通过文献调研,我们了解到目前检测类胡萝卜素的方法主要有反相液相色谱法(RP-HPLC法)和拉曼光谱法两种。本实验将采用两种方法来检测胡萝卜中的类胡萝卜素。
(一)RP-HPLC法
反相液相色谱法是检测类胡萝卜素的常用方法,包括提取、皂化和分离检测三个部分,该法能够实现对类胡萝卜素各组分的分离和准确定量。
自然条件下,类胡萝卜素通常与糖、蛋白质等呈结合态的形式,所以首先需要对其进行提取。文献报道的提取方法有有机溶剂提取法、酶反应法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法、超临界流体萃取法等,本实验选用条件较为简单的有机溶剂提取法。根据[3][4][3][4][2][1]
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