鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)分离纯化的研究

对鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的分离纯化进行了研究。工艺流程为：卵黄→8倍水稀释并搅拌10min→用HCl调pH至5.2后在4℃静置2h去沉淀→在上清夜中加入95%冰乙醇(-20℃)使终浓度为60%(v/v)→4℃搅拌20min后离心(22000r/min,4℃,25min)→收集沉淀并加入0.028mol/LNaCl溶液在4℃下过滤除去脂蛋白沉淀→收集的滤液用SDS-PAGE法进行纯化得纯度为98%的lgY。用大肠杆菌(E.coli)对其

维普资讯 doc.xuehai.net

现代食品科技

Mo e nF o ce c n eh oo y d r o dSin e dT c n lg a

2 0, o., .1 0 7 V 1 3 No1 2

鸡卵黄免疫球蛋白 (g ) IY分离纯化的研究 任平国，徐启红

(漯河职业技术学院，河南漯河 4 2 0) 6 00 摘要：对鸡卵黄免疫球蛋白( Y的分离纯化进行了研究。 I ) g工艺流程为：卵黄 8倍水稀释并搅拌1 n 0用H l H . mi c调p至5后在4℃ 2静置2去沉淀在上清夜中h/. h￣ 9 N 5%冰乙醇( 0℃) . 2使终浓度为6%( v 0 v)/ 4℃搅拌2 ai离￣ 2 00r n C, mi)收集沉 0r n (2 0 mi4。 2 n后/, 5 淀并h/.. 8 l Na溶液在 4下过滤除去脂蛋白沉淀收集的滤液用S SP GE进行纯化得纯度为9%的I￣ 00 mo L CI N 2/℃ D .A法 8 g用大肠杆菌 Y。 (. l对其活性进行测定，效果良好，此方法能保持免疫球蛋白的活性。 Ec i o) 关键词：鸡卵黄免疫球蛋白( Y;乙醇沉淀；分离纯化 1 ) g中图分类号：T 9 6 l Q 3,;文献标识码：A;文章篇号： 7 .0 820 )1 040 2 l 39 7(0 71- 2 .3 6 0

An l ss0 h e r t n a d P rfc to f m m u o l b l f a y i n t eS pa a i n u i a i n o o i I n go u i 0 n

e gy l(g g okIY) RE igg o XU Qi o g N Pn -u, - n h (u h oai a T c n lg ol e L o e 6 0 0 C ia L o e ct n l eh oo yC lg, u h 2 0, hn ) V o e 4 A s a t T e e aa o n uic t n fmmu o l ui o e g ok( Y w r s d d T e x r o y l a dw t (:,/ wa b t c: h p rt n dp r ai l r s i a i f o o n g b l f g l 1 ) ee t i . h t e f ok n a r 1 v ) s o n y g u e mi u e 8 v

sr dfr 0 nad hni Hv l a js do52 i C. f r l i e x r r tr n e s a e s dut .wt H I t a

n t t e h t ie o 1 mi t tp uw a et h A ep c g h mi u f 2 a 4℃. e u e t t a i t t o t pma s le wi hs n a w du d h 9 5% i t o ( 0℃) nii o cn a o ah d6 c e a l- e h n 2 u t s n e t t nr c e 0% ( v. h nte oui a i e r 0mi a 4℃ a dcnru e ( 2 0 lt c ri e v ) T e l o w s t rdf n t/ h s tn sr o 2 n e tfg d 2 0 0 i r n f r 5mi t/ mi ) o na 2 4℃ . e rcp tt sc l ce d a d d it .2 l CI o u in T ec r s o d n u p n i nwa I rd h p T e i i ewa o l tda d e o 00 8mo/ Na lt . a e n n L s o h o e p n ig s s e s s t e o i f e

a t 4℃ t e v el o r t i d me t n efl aewa e u f db DS P o rmo et p p o en s i n d t t t s h np r e y S— AGE meh d . iig tep o en lY t ep r y o 9 h i e a h ir t i i t o s gv n r t i h g wi t u i f 8 hh f

%.t a t i s e r n dwi sh r ha oi Ec l a d eut so e a ti p r ct nme o o l w lm i a e c vt o I c vt wa t mie t E c ei i c lf oi n s l w d h ths u f a o t dc ud el a ti t t i f s i y d e h c ) r sh t i i i h n nh a i y l gY.

Ke o d:mmuo lb l f g o ( Y)e y a oo peiit n S pr in n uict n y rs l w n g uio eg l 1;t l l h lrc t i; eaao d r ai o n y kg h c p ao t a p f o i

鸡卵黄免疫球蛋白( u o l ui feg y l, I mm n go l o g o b n k简称 IY,又称鸡卵黄抗体，是母鸡血液中的免疫球 g)

好。

蛋白传递至鸡卵黄并在子鸡孵育过程中和孵育后对予 鸡起保护作用

的免疫球蛋白。大量的研究发现，g 经 IY具有不与人类补体…以及类风湿因子结合等免疫学 J特性，现在已被广泛应用于免疫学诊断和医药等许多方面，因而对 IY分离纯化的研究有着重要意义。g g IY的分离、纯化丰要包括含有 IY的蟹黄水溶性蛋白组 g

1材料与方法 1材料、试剂与仪器 . 1市售新鲜鸡蛋或4℃保鲜鸡蛋若 1:9 I 5%冰乙醇

( 0℃,预冷) . 8mo/的N C溶液；r s C缓一 2;00 l 2 L a1 i— 1 f H 冲液；S p a e 0凝胶r eh dx G2 0深圳市腾龙源实业有限公司)D A葡萄糖凝胶A 5(L;E E一0I京百星高科技术货物进出口公司 ) S—AG; DSP E成套电泳试剂 ( mesa A rhm

分( F的分离和 WS WS ) F中 IY的分离。目前，困际上 g 已经开发了多种鸡卵黄抗体分离纯化法，主要包括有

Boc ne(F C romo;马斯亮蓝R 2 0I京索 i i cs ) op r i考 se S n -5 (L 莱宝科技有限公司) 7 1; 2分光光度汁(上海第分析仪器厂) G1—.;L 02 A高速离心机 (L 4 I京用离心机厂); 大肠杆菌(. l ( Ec i卫生部中国药品生物制品鉴定所) o);

机溶剂抽提、盐析与 DE E色谱相结合、疏水色谱及 A

凝胶过滤等。然而，这些方法普遍存在着步骤多、批 量小、安全性不岛利回收率低等问题。为此，我们以 H r oh[等人提小的冰乙醇分级离心法为基础，对 oi si1 k 3 冰乙醇分级离心法分离纯化进行了深入的研究，取得

其它试剂均为分析纯。 l实验方法 - 2 l .蚩黄水溶性组分( F的制备 -1 2 WS )选择市售新鲜鸡蛋或于4℃保鲜的鸡蛋，用卵黄

了较为理想的结果，分离纯化得剑的 lY活性比较 g 收稿日期：2 0— 7 1 0 70—6

2 4

doc.xuehai.net

第1页