纳豆激酶液体发酵条件的优化

以纳豆枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilisnatto)为出发菌株,研究了其液体发酵产生纳豆激酶(Nattokinase,NK)的培养基组成(碳源、氮源、碳氮比和金属离子组成)和培养条件(温度、初始pH值、发酵时间、接种量和装液量)对产酶量的影响。结果表明,液体发酵培养基的最佳碳源为麦芽糖,浓度为1.0%;最佳氮源为大豆蛋白胨,浓度为2.0%;添加无机盐组分为MgSO40.05%、CaCl20.02%、KH2PO40.

21, 18 o1亿学与佳物 Z程 01 o2 N. V . Ch m i t& Bie g n e ig e sr y o n ie rn

纳豆激酶液体发酵条件的优化 胡伶俐。李军，张云峰。文治杨 (北国力生物技术开发有限公司，北武汉 40 7 )湖湖 3 0 4

摘要：以纳豆枯草芽孢杆菌 ( a i u u t i n t )出发菌株，究了其液体发酵产生纳豆激酶 ( at kn s, B cl s bi s at为 l s l o研 N t iae o

NK的培养基组成 (源、源、氮比和金属离子组成 )培养条件 (度、始 p值、酵时间、种量和装液量 ) )碳氮碳和温初 H发接对产酶量的影响。结果表明，体发酵培养基的最佳碳源为麦芽糖，液浓度为 10; .最佳氮源为大豆蛋白胨，度为 2 0;浓 . 添加无机盐组分为 Mg O 00、 a 1 . 2、 O4.。优化发酵培养条件如下：龄为 1,酵周期为 7 S . 5 C C2 0 KH2 0 4 0 P种 8h发 2 h温度为 3℃,始 p值为 7 2装液量为 2/O, 7初 H ., 0 mL l 0mL,种量为 2 0。通过优化培养基和发酵条件，酶活性接 . NK 达到 2 O U mI。 1 OI ~

关键词：豆枯草芽孢杆菌；纳纳豆激酶；体发酵液中图分类号： 6 . TQ 4 4 8文献标识码： A文章编号： 6 2 5 2 ( 0 1 O—0 4—0 1 7— 4 5 2 1) 1 0 2 4

18 9 7年，见洋行在日本的传统发酵食品纳豆中须 发现了纳豆激酶 ( t kn s, Nat iae NK )研究发现， o D。 3 NK是由纳豆枯草芽孢杆菌 ( a ils u t i n t, B cl bi s at u s l o

斜面培养基：于菌种保藏，用主要成分为琼脂粉 2 g大豆蛋白胨 1g牛肉膏 0 5g、、 .、Na 1 .、馏水 C 5g蒸 0 10mL,H值 7 0 .,2℃高压灭菌 1 n 0 p .~7 2 1 1 5mi。种子培养基：用于斜面菌种的活化，主要成分为蔗糖 1、 0g大豆蛋白胨 1、 C 、馏水 1 0 0g Na 1 g蒸 5 0 0mI,

B N) S产生的一种丝氨酸蛋白酶，能显著溶解体内外血栓，明显缩短优球蛋

白的溶解时间 ( I, E不但能直接 T) 作用于纤溶蛋白，能激活体内纤溶酶原，还增加内源性纤溶酶的量与作用，而更有效地发挥溶栓性能 _。从 2]目前临床上治疗血栓的药物，都具有一定的局限

p值 7 O ., 2℃高压灭菌 1 n H .~7 2 1 1 5mi。 液体发酵培养基：源，源， O, a 1,碳氮 KH P C C Mg O,中碳源为麦芽糖、萄糖、糖、糖、 S其葡乳蔗甘油，源为大豆蛋白胨、白胨、氮蛋胰蛋白胨、肉膏。牛 1 1 2试剂 ..

性，如毒性强、副作用大、生产成本高、价格昂贵、内体 半衰期比较短等E。而纳豆激酶安全性好、毒副作 3 3无用l、用迅速、 4作]成本低、由细菌发酵生产，可可用于开发新一代溶栓剂或保健食品，是一种很有潜力的新型

琼脂糖、芽糖、豆蛋白胨、维蛋白原 ( i~麦大纤 Fb io e ) Sg n g n, ima公司；激酶 ( o iae活力 2 0 尿 Ur kn s, 00

口服溶栓药物，具有极为广阔的应用前景。目前，液体 发酵得到的纳豆激酶的活性普遍偏低，高单位产物提的酶活力和生产效率对纳豆激酶的推广具有重要的意义。作者在此优化了纳豆激酶液体发酵的培养基组成和培养条件，拟为纳豆激酶的产业化生产奠定基础。

I支)凝血酶 ( h o i, U/、 T rmbn活力 6 0i支 )中国药 9 u/,品生物制品检定所；酵母膏、肉膏，汉菌友生物技牛武术有限公司；它试剂均为国产分析纯。其 1 1 3仪器 .. 7 5分光光度计，海第三分析仪器厂；心 4型上离机，日本 OL YMP AS公司； JⅡa恒温摇床， HY -型上海欣鑫自动化设备有限公司；燥箱，干上海实验仪器厂；

l实验 1 1材料、剂与仪器 .试

电热恒温水浴箱，州市长江实验仪器厂；净工作通超 台，州净化设备厂；苏双层落地恒温振荡器，仓光明太 实验分析仪器厂。 1 2方法 .

1 1 1菌株与培养基 ..纳豆枯草芽孢杆菌 ( a i u u t i n t, S B cl s bi s at B N) l s l o

W一9 3由 H一3远荣生物工程有限公司提供 )诱 0

2, 1(经 变驯化得到。

1 2 1菌体培养 ..

收稿日期： 0 0 1—2 21— 0 8作者简介：伶俐 ( 9 4 )女，北武汉人，士，究方向：酵工程。E ma: ilf h y h o c r. i胡 18一，湖硕研发— i l yi@ a o .o c。 l n s n l

第1页