自身免疫性感音神经性聋基因治疗的实验研究

目的：研究以重组复制缺陷型腺病毒为载体的Fas配体(Fas—Ligand,即FasL)基因和白细胞介素10(即IL-10)基因治疗实验性自身免疫性感音神经性聋。方法：采用同种内耳组织抗原加弗氏佐剂免疫豚鼠,造成自身免疫性感音神经性聋的动物模型28只,按配对设计将其分为4组,通过鼓阶微量注射的方式,A组注入携带FasL基因的腺病毒(Ad-FasL),B组注入携带IL-10基因的腺病毒(Ad—IL-10

东南大学学

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自身免疫性感音神经性聋基因治疗的实验研究 蔡文君谭长强，, 李玉瑾黄和李霜，, (. 1南京医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科暨耳鼻咽喉科学研究室，江苏南京 2南京工业大学生物化学中心， .江苏南京 200 ) 10 9 202; 10 9

[摘要]目的：究以重组复制缺陷型腺病毒为载体的 F s研 a配体 ( a—iad即 Fs )因和白细胞介素 1 ( I一0基因治疗 F s gn, aL基 L 0即 L1)实验性自身免疫性感音神经性聋。方法：用同种内耳组织抗原加弗氏佐剂免疫豚鼠，成自身免疫性感音神经性聋的动物采造 模型2 8只，配对设计将其分为 4组，过鼓阶微量注射的方式，组注入携带 Fs按通 A aL基因的腺病毒 ( dF s ) B组注入携带 A—aL,

I一0基因的腺病毒 ( dI一0, L1 A— 1 )c组单纯注入腺病毒 ( L携带绿色荧光蛋白， A— F ) D组注入等量的磷酸盐缓冲液。基因即 dG P, 导入 7d后行听觉脑干诱发电位 ( B测试，取颞骨制作石蜡切片并行 H A R)后 E染色和光镜观察，组各取两耳行螺旋韧带和基每

底膜透射电镜观察。每组各取 3只( )免疫荧光和酶免疫组织化学试验， 6耳行以检测基因产物表达和腺病毒转染情况。结果：免疫组织化学显示携带目的基因的腺病毒可以转染血管纹、螺旋韧带、o i螺旋神经节、轴小血管周围及其耳蜗的骨 c n器、蜗 壁等部位的细胞，产生相应的蛋白产物 (L 1并 I一0和 F s ) A Rn波阈值的均值对比结果显示， aI。 B l A组和 B组明显低于 C组和 D

组。内耳组织的免疫炎性反应亦明显较 c组减轻。结论：重组复制缺陷型腺病毒可以携带目的基因转导入内耳，并在内耳表 达基因产物，其抑制炎症反应的作用可有效地减轻自身免疫性感音神经性聋的内耳组织免疫炎性损伤和听觉功能障碍，望有成为治疗自身免疫性感音神经性聋新的方法和途径。

[关键词]基因治疗；自身免疫性感音神经

性聋；鼠豚[中图分类号]R 6 .3;R 3 74 4 1一3[文献标识码]A [文章编号]17—24 20 )20 7—6 6 16 6 (0 9 0—09 0

17 9 9年 Mc ae依据其临床发现， 1 Cb即 8例听力障碍患者经过免疫抑制治疗后听力有明显改善，出了提自身免疫性感音神经性聋 ( uom u esnoierl a t m n e sr ua i n h a n s, S H )概念。之后的进一步研究发 er gl s A N L的 i o

反应，这为基因治疗感音神经I聋提供了生物学证据。生 目前因为复制缺陷性腺病毒载体具有病毒滴度高、染效率高 ( 0% )宿主细胞范围广、源基因转 10、外容量大、定和无插入突变危险等特点，稳已经成为基因转导研究中应用最多的载体之一。Y g等将腺病 ai毒携带的 G N D F基因从圆窗膜注射人鼓阶， D F基 GN因在蜗内得到表达并发挥作用。 基于上述研究状况和现有研究工作基础，本项目 组拟将利用基因治疗的独特性和内耳可行局部治疗古§独特解剖特点，自身免疫性感音神经性聋模型动物对进行内耳免疫抑制或调节基因的试验性治疗研究，以探讨其治疗效果和可能发生的副反应情况。

现，自身免疫性损害不仅可累及耳蜗，可波及前庭，还 故又提出了自身免疫性内耳病 ( uom n n e a ati mu ein rer dsae A E 概念。目前 A N L的病因和发病 i s, I D) e SH 机制尚不十分清楚，临床缺乏特异性诊断方法，于对

AN S HL患者的治疗亦存在着一些问题，主要是采用皮 质激素或免疫抑制剂治疗，然疗效较快、虽较好，该类但药物毒副作用多，而且还存在停药后复发率较高等问题。 近年来随着分子生物学研究的深入和基因工程技 术的进展，因治疗已成为许多相关疾病治疗研究方基

面的热点和新希望。基因治疗是根据特定的治疗目的 基因将 D A导入到宿主细胞中并在其中表达。1 9 N 96

1材料和方法 1 1实验动物 .

年 L la i a n等报道了将基因导入动物内耳， w以后关于内耳的基因治疗成为一个热点，在载体选择、入并导

健康

成熟豚鼠，白色红目，重 3 0 g左右，廓体 0耳反应正常，镜检查排除中耳疾患，有动物均由南京耳所

方法和安全性评估等方面取得了很大的进步。基因工 程技术已能构建特异性载体，可携带治疗基因导人动

青龙山养殖场提供。 1 2内耳组织粗制抗原 ( r d n e a nie s . cu ein rer a t n, g CE g) I A s制备

物耳内，在动物内耳获得高效表达，生具有高度生产 物活性的稳定的基因产物，并且不产生病毒相关的耳毒性 [基金项目]国家自然科学基金资助项目(0 7 8 6 34 17 )[作者简介]蔡文君( 9 1一，河北保定人， 18 )女，在读硕士研究生。 [通讯作者]谭长强

豚鼠 CE g制取方法参考文献[, IA s 4]主要步骤：

电话：62—3 15 16 7;a:62。3 80 5 E m i cf0￣@yho el 8—5 8 74 1 8 7 F x8—5 85 7 5;— al c2( : t ao. l

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