高效液相色谱法测定三棱超临界萃取物中芦丁的含量

高效液相色谱法测定三棱超临界萃取物中芦丁的含量

时珍国医国药2008年第19卷第3期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.3

3　结果分析

从正交分析结果及方差分析表来看,各因素对黄芩中总黄酮含量的影响程度为C>A>B,且C为极显著性差异因素,A、B为显著性差异因素,C3>C2>C1,A1>A2>A3,B3>B2>B1,最佳提取条件为A1B3C3,即溶剂用量(12,10,10),提取时间(2,1,1)h,提取3次为最佳提取工艺条件。4　讨论

分光光度法测定黄酮含量的常用方法有直接测定法、Al(NO3)3法和AlCl3法,为了选择合适的测定方法,我们用对照品溶液以甲醇为空白对照,进行190～500nm的紫外扫描。扫描结果显示在波长277.6nm处有最大吸收值,峰形好,所以选择277.6nm做为检测波长。进一步观察对照品溶液于1h内的稳定性时,变化很小,因此采用不加显色剂方法直接测定黄芩总黄酮。

根据实验结果本实验优选的最佳工艺为:提取溶剂为30%乙醇,提取3次,分别加12,10,10倍量溶剂,提取时间2,1,1h。为了验证这一结果,取3份药材,每份50g,按照所选的提取工艺:提取溶剂为30%乙醇,提取3次,分别加12,10,10倍量溶剂,提取时间2,1,1h。最后得到总黄酮含量分别为19.03%,18.65%,19.48%。通过验证实验,总黄酮的提取效率都得到了比较好的结果。说明所选的工艺是稳定而有效的,适合继续放大生产。

参考文献:

[1]　张　虹,范春水.黄芩有效成分对心脑血管的作用[J].中国新医

药,2004,3(3):63.

[2]　龚盛昭,袁水明.黄芩苷的提取工艺改进研究[J].广东化工,

2002,6:5.

,3

(,北京　100023)

摘要:目的2萃取物中芦丁的鉴别和含量测定方法。方法在聚酰胺膜上点样,以80%乙醇作为展

开剂鉴别芦丁,采用SymmetryC18色谱柱,以乙腈-四氢呋喃-0.2%枸橼酸(14∶1∶85)为流动相,柱温25℃,在流速为

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1.0ml min,360nm的检测波长下,测定芦丁含量。结果在三棱的超临界萃取物中含有芦丁成分,建立的液相色谱方法在芦丁浓度为0.00340～0.02432mg ml-1的范围内线性关系良好,样品在8h内稳定,平均加样回收率为98.56%,以峰面积作精密度实验,RSD为1.38%。结论三棱的超临界萃取物中含有芦丁,建立的高效液相色谱方法线性关系良好,精密度和回收率高,适合于三棱中芦丁含量的测定。关键词:反相高效液相色谱;　薄层色谱鉴别;　芦丁;　超临界萃取

中图分类号:R282.5;R284　　文献标识码:A　　文章编号:100820805(2008)0320684202

DeterminationofRutininSFEExtractofSparganiumstoloniferumbyRP2HPLC

LIKe2yi,LIUHong2mei

3

(BiochemicalEngineeringCollegeofBeijingUnionUniversity,Beijing100023,China)

Abstract:ObjectiveToexplorewhetherthereisrutininSFEextractofSparganiumstoloniferumbyTLCandestablishamethod

todetermineitscontentbyRP-HPLC.MethodsThedeterminationwascarriedoutoveraSymmetryC18columnat25℃.Meth2

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odstetrahydrofuran:0.2%citricacid(14∶1∶85)wasusedasmobilephaseatavelocityof1ml minandthedetectionwavelengthwassetat360nm.ResultsRutinwasfoundinSFEextractofSparganiumStoloniferum.Thecalibrationcurvewaslin2

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earintherangeof0.00340～0.02432mg mlforrutin.Thesamplewasstablewithin8hoursandtherecoveryrateofrutinwas98.56%.Andinprecisiontest,RSD=1.38%.ConclusionThereisrutininSFEextractofSparganiumstoloniferum.TheestablishedRP-HPLCmethodhasperfectlinearrelationship,highprecisionandrecoveryrateanditissuitabletodeterminethecontentofrutininSFEextractofSparganiumStoloniferum.

Keywords:RP-HPLC;　TLC;　Rutin;　Supercriticalextract

　　三棱Sparganiumstoloniferum,始载于《本草拾遗》,为常用中药,是荆三棱科植物黑三棱的干燥块茎,主要含挥发油类和黄酮类[1～3],具有抗凝血及抗血栓和镇痛作用[4],临床用于治疗中风病、冠心病、宫外孕、阑尾周围脓肿及慢性肝炎、慢性盆腔炎等。

[5]

另外其和莪术一起使用具有抑制肿瘤的功能,在抗癌中药的配方中起着非常重要的作用。目前文献关于三棱的提取研究并不多,尤其是对其化学成分等基础研究更少,文献[6]报道的黄酮类成分为山萘酚和5,7,3’,5’-四羟基双氢黄酮醇-3-O-β-D-葡萄糖苷,还没有三棱中含有芦丁成分的文献报道。因此本实

收稿日期:2007204207;　修订日期:2007207211

作者简介:李可意(19682),女(汉族),辽宁锦州人,现任北京联合大学生物化学工程学院副主任药师,学士学位,主要从事药物分析方面的研究工作.3

通讯作者简介:刘红梅(19702),女(汉族),安徽霍邱人,现任北京联合大学生物化学工程学院副教授,硕士学位,主要从事传质与分离技术研究工作.

验采用薄层色谱法对三棱超临界二氧化碳萃取物中芦丁进行了鉴定,并利用高效液相色谱法对芦丁的含量进行测定。1　仪器与材料1.1　仪器与试剂江苏南通华安公司的Ha120-50-01型超临界萃取装置;岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪,岛津ShimadzuCLASS-VPV6.12SP4工作站;KQ-250B型超声波清洗器。1.2　对照品与供试品三棱(北京同仁堂集团);芦丁对照品(中国生物制品检定所);甲醇(分析纯);乙腈(色谱纯);四氢呋喃(色谱纯);枸橼酸(色谱纯);二氧化碳(99.95%);本实验用水均为超纯水。2　方法与结果2.1　三棱超临界提取物中芦丁的薄层鉴别2.1.1　供试品溶液的制备三棱生药粉碎、过40目筛、60℃烘干6h,精确称1000g过筛的三棱粉,加入180ml夹带剂,充分混合过夜,然后置于萃取釜中。对萃取釜、解析釜Ⅰ、解析釜Ⅱ分别进行加热,当温度分别达到设定温度时,通过高压泵对萃取釜和两个解析釜进行加压,当压力分别达到设定压力后,进行静态

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